[發明專利]基于一次成苗的桃樹雜種胚試管培育方法及培育基體

有效

• 申請號: 201610252780.8
• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN105875399B
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 孫清榮;孫洪雁;李林光;何平;王海波
• 申請（專利權）人: 山東省果樹研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業)37240
• 代理人: 李茜

一、技術領域

本發明涉及一種桃樹雜種胚試管培育方法及培育基體，尤其是一種基于一次成苗的桃樹雜種胚試管培育方法及培育基體。

二、背景技術

植物的胚培養在克服遠緣雜交種胚的早期敗育、胚挽救、誘導體細胞胚的發生及砧木快繁等方面具有重要作用，特別是在核果類果樹作物如桃、杏、櫻桃等的早熟品種上，借助于胚培養技術，可成功實現幼胚即未成熟胚培養成苗，是實現核果類果樹特早熟品種培育的基礎，因此雜種桃胚試管培育方法及培育基體是一種重要的生物育種方法和育種基質，在現有的一種基于一次成苗的雜種果樹胚試管培育方法及培育基體中，因為早熟果樹品種的胚通常發育不全,采用常規播種不能出苗或萌芽率很低,而采用胚培養技術可以克服種胚不出苗的難題，但一些針對品質或抗性改良進行果樹雜交育種的雜種，即使雜種胚已經發育成熟，常規播種也不能出苗或出苗率很低，這一問題嚴重阻礙了果樹品種改良的育種進程。。

三、發明內容

本發明的客體是一種基于一次成苗的桃樹雜種胚試管培育方法，

本發明的客體是一種基于一次成苗的桃樹雜種胚試管培育基體。

為了克服上述技術缺點，本發明的目的是提供一種基于一次成苗的雜種果樹胚試管培育方法及培育基體，因此提高了雜交果樹種子的發苗率。

為達到上述目的，本發明采取的技術方案是：一種基于一次成苗的雜種果樹胚試管培育方法，其步驟是：a、無菌雜種胚的獲得：把果樹種子的種胚進行消毒處理得到無菌雜種胚樣本；

b、試管植株的獲得：在裝有試管內培養基質的試管內，把無菌雜種胚進行培養，獲得胚萌發的植株得到試管植株；

c、試管外植株苗體的獲得：當試管植株的胚根上已生長形成若干側根并且大部分胚芽已生長形成10 cm以上的新梢；移栽在試管外育苗基質中，培育得到試管外植株。

由于設計了對果樹種子的種胚進行分步培育，在試管內培養基質中培育得到試管植株，在試管外育苗基質中培育得到室外正常生長的植株，不再直接種植果樹種子，因此提高了雜交果樹種子的發苗率。

本發明設計了，其步驟是：選取桃優系‘93’ב春雪’雜交種的成熟果實的胚為培育樣本，

a、無菌雜種胚的獲得：在超凈臺上用70%酒精擦洗果實表面，用滅菌刀切開果實取核，用滅菌錘子砸開核取出種胚，用無菌鑷子剝去種皮，把去種皮的胚用濃度為100m/L-500mg/L的赤霉素即GA₃進行預處理得到無菌雜種胚樣本；

b、試管植株的獲得：去種皮胚經過100m/L-500mg/L的赤霉素預處理0.5-3小時后的無菌雜種胚樣本接種在裝有培養基質：MS + 1-5 mg/L GA₃ + 25-35 g/L蔗糖的試管內，在培養室進行培養，獲得胚萌發的植株得到試管植株；

c、試管外植株苗體的獲得：當試管植株在試管內培養4-6周時，胚已萌發生長成為綠苗體，綠苗體表現為：胚根上已生長形成若干側根并且大部分胚芽已生長形成10 cm以上的新梢；

綠苗體進行試管外移栽，移栽前，先把瓶蓋打開，在溫度為20-25℃的散射陽光下練苗5-7天，用鑷子把苗從瓶中取出，放入水盆中，洗掉根部殘余培養基，移栽入裝有試管外育苗基質的營養缽中，苗移栽入營養缽后，澆透水，用透明性好的塑料溥膜進行覆蓋，對剛移栽的小苗進行保濕處理，以后每隔3-5天噴一次水，3-4周時，小苗長出新葉，此時可揭去塑料溥膜得到試管外植株。

本發明設計了，試管內培養基質設置為包含有基本培養基、植物生長調節物質即赤霉素（GA₃）、 碳源即蔗糖、抗氧化劑即半胱氨酸和抗壞血酸、無離子水、瓊脂粉；

其中：基本培養基設置為 MS（Murashige and Skoog）培養基, MS 基本培養基組成為：