[發(fā)明專利]一種霍亂弧菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610252236.3
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105754906A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝昭聰;吉彩霓;但琨;呂敬章;鄭文麗;路強;楊燕秋;杜林;陳青黛
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市檢驗檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;G01N33/569;C12R1/63
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及致病菌增菌培養(yǎng)基，特別是涉及一種霍亂弧菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，世界范圍內(nèi)的食品安全惡性事件屢屢發(fā)生，食源性疾病與食品污染構(gòu)成了一個巨大并不斷擴大的世界性公共衛(wèi)生問題。霍亂(Cholera)是由O1血清群和O139血清群霍亂弧菌引起的急性腸道傳染病，是以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣、能引起大流行為特征的國際檢疫傳染病之一，也是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的甲類傳染病之一，《國內(nèi)交通衛(wèi)生檢疫條例》也將其列為檢疫傳染病。

水產(chǎn)品受到霍亂弧菌污染而引起霍亂傳播、流行日益嚴(yán)重。我國已加入WTO，隨著進出口貿(mào)易的增長，進出口水產(chǎn)品的增長速度必將進一步加快。與此不相適應(yīng)的是，現(xiàn)階段我國霍亂弧菌的檢測手段的發(fā)展卻相對滯后，主要表現(xiàn)在對霍亂弧菌檢測仍停留在傳統(tǒng)常規(guī)方法上，檢測時限長，這也是實際工作迫切亟待解決的問題。根據(jù)傳染病的有關(guān)管理規(guī)定，霍亂疫情要做到早發(fā)現(xiàn)、早報告、早診斷、早處理。因而，應(yīng)用快速、特異、靈敏的檢測試劑和檢測方法進行霍亂弧菌檢測，具有十分重要的意義。

膠體金免疫層析法由于特異性高，靈敏度好，檢測速度快受到人們關(guān)注，但該方法要求待測樣品中含菌量達到10⁶cfu/ml，然而水產(chǎn)品霍亂弧菌含菌量較低(10³cfu/100g以下),無法滿足使用膠體金免疫層析法為原理的快速診斷試劑所要求的含菌量，因此目前膠體金免疫層析法在水產(chǎn)品霍亂弧菌檢測的應(yīng)用尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于此，本發(fā)明第一方面提供了一種霍亂弧菌增菌培養(yǎng)基，以解決水產(chǎn)品霍亂弧菌含菌量較低,無法滿足使用膠體金免疫層析法為原理的快速診斷試劑所要求的含菌量的問題。

第一方面，本發(fā)明提供了一種霍亂弧菌增菌培養(yǎng)基，每100mL所述培養(yǎng)基中包括如下含量的各組分：氯化鈉0.5-2.0g，蛋白胨0.2-3.0g，甘露醇0.005-1.2g，1％亞碲酸鉀5-40μl，蔗糖0.5-2.5g，脫氧膽酸鹽0.05-0.08g，豬膽鹽0.05-0.10g，慶大霉素30-60單位，甘氨酸0.376g，氫氧化鈉0.0160-0.0672g，其余為蒸餾水，培養(yǎng)基的pH值為8.5-9.4。

本發(fā)明霍亂弧菌增菌培養(yǎng)基使用甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液配制，該緩沖液不會抑制細菌生長，其甘氨酸可促進霍亂弧菌的生長，因此采用該緩沖液體系可有效提高待測樣品中的待檢菌含量。本發(fā)明增菌培養(yǎng)基通過加入一定量的甘露醇和蔗糖為霍亂弧菌提供營養(yǎng)，加快了霍亂弧菌的繁殖。同時，本發(fā)明增菌培養(yǎng)基通過加入適量的慶大霉素、亞碲酸鉀、脫氧膽酸鹽、豬膽鹽以抑制雜菌的生長。

優(yōu)選地，每100mL所述的培養(yǎng)基中包括0.03-1.0g甘露醇。

優(yōu)選地，每100mL所述的培養(yǎng)基中包括0.8-2.0g蔗糖。

優(yōu)選地，每100mL所述培養(yǎng)基中包括如下含量的各組分：氯化鈉1g，蛋白胨1g，甘露醇0.04g，1％亞碲酸鉀10μl，蔗糖1g，脫氧膽酸鹽0.08g，豬膽鹽0.10g，慶大霉素40個單位，甘氨酸0.376g，氫氧化鈉0.0352g，其余為蒸餾水，培養(yǎng)基的pH值為9.0。

第二方面，本發(fā)明提供了一種霍亂弧菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：

取氯化鈉0.5-2.0g，蛋白胨0.2-3.0g，甘露醇0.005-1.2g，蔗糖0.5g-2.5g，脫氧膽酸0.05-0.08g，豬膽鹽0.05-0.10g，甘氨酸0.376g和氫氧化鈉0.0160-0.0672g，得到固體混合物，向所述固體混合物中加入蒸餾水使固體物質(zhì)溶解，待溶解后加入慶大霉素30-60單位和1％亞碲酸鉀5-40μl，并加入蒸餾水定容至100mL，再于121℃±1℃高壓滅菌15-20min后，分裝存于2-8℃?zhèn)溆茫没魜y弧菌增菌培養(yǎng)基的pH值為8.5-9.4。

優(yōu)選地，所述固體混合物中包括0.03-1.0g甘露醇。

優(yōu)選地，所述固體混合物中包括0.8-2.0g蔗糖。

優(yōu)選地，所述制備方法包括以下步驟：取氯化鈉1g，蛋白胨1g，甘露醇0.04g，蔗糖1g，脫氧膽酸鹽0.08g，豬膽鹽0.10g，甘氨酸0.376g和氫氧化鈉0.0352g，得到固體混合物，向所述固體混合物中加入蒸餾水使固體物質(zhì)溶解，待溶解后加入慶大霉素40個單位和1％亞碲酸鉀10μl，并加入蒸餾水定容至100mL，再于121℃±1℃高壓滅菌15-20min后，分裝存于2-8℃?zhèn)溆茫没魜y弧菌增菌培養(yǎng)基的pH值為9.0。