[發明專利]一種與水稻小種專化性抗稻瘟病基因緊密連鎖的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201610252190.5
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105779622B
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 鮑永美;張紅生;何彎彎;黃驥;王建飛;王州飛;程金平
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

1.一種用于檢測與水稻小種專化性抗稻瘟病基因緊密連鎖的分子標記的引物對或引物對組，其特征在于所述的引物對為引物對A或引物對B；所述的引物對組由引物對A和引物對B組成；所述引物對A為由如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段和如SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段組成的引物對；所述引物對B為由如SEQ ID NO.3所示的核苷酸片段和如SEQ IDNO.4所示的核苷酸片段組成的引物對。

2.權利要求1所述的引物對或引物對組在制備用于檢測或輔助檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因的試劑盒中的應用。

3.一種用于檢測或輔助檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因的試劑盒，其特征在于該試劑盒包含有權利要求1所述的引物對或引物對組。

4.根據權利要求3所述的用于檢測或輔助檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因的試劑盒，其特征在于該試劑盒還包含有PCR技術常用的試劑。

5.權利要求1中所述的引物對或引物對組、權利要求3或4中所述的試劑盒在檢測或輔助檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因或選擇水稻抗稻瘟病品種中的應用。

6.一種檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因或選擇水稻抗稻瘟病品種的分子標記方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)提取待測水稻樣品基因組DNA；

(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述的引物對或引物對組進行PCR擴增，獲得PCR產物；

(3)檢測PCR產物如果擴增出大小為84bp或/和158bp的分子標記片段，標志水稻樣品中小種專化性抗稻瘟病基因Pi-hk2存在，則待測的水稻樣品為抗稻瘟病品種或候選的抗稻瘟病品種。

7.根據權利要求6所述的檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因或選擇水稻抗稻瘟病品種的分子標記方法，其特征在于所述PCR擴增的反應體系為：10×含Mg²⁺的緩沖液1.0μl，4pmol/μl的所述分子標記引物對1μl，2.5mM dNTPs 0.2μl，5U/μl的Taq酶0.1μl，10ng/μl的水稻樣品基因組模板DNA 1μl，加水至10μl。

8.根據權利要求6所述的檢測水稻小種專化性抗稻瘟病基因或選擇水稻抗稻瘟病品種的分子標記方法，其特征在于所述PCR擴增的反應程序為：95℃預變性5分鐘后；95℃變性40秒，55℃退火40秒，72℃延伸40秒，循環33次；最后72℃延伸10分鐘。

9.權利要求6所述的方法在提高水稻抗病品種育種進程中的應用。