[發明專利]一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重復制備沒食子酸的方法

在審

• 申請號: 201610248509.7
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105695518A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 邱樹毅;吳鑫穎;王廣莉;簡輝;周鴻翔;王曉丹;任佳明;周羅娜
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12P7/42
• 分類號: C12P7/42;C12N11/02;C12R1/685
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 吳無懼

1.一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重復制備沒食子酸的方法，其 特征在于：包含以下步驟：(1)單寧酶孢子懸浮液的制備：黑曲 霉B1401的活化及其生產菌孢子懸浮液的制備；(2)固定化細胞 的制備：產酶培養基配置、載體材料的處理和固定化細胞的制備 及其產酶培養；(3)固定化菌體生物法轉化單寧酸制備沒食子酸： 在經培菌產酶好的固定化菌體溶液中添加單寧酸進行反應，得到 沒食子酸；(4)固定化菌體生物法重復轉化單寧酸制備沒食子酸： 將步驟(3)中轉化好的發酵液進行固定化菌體與發酵液分離，重 新在固定化菌體中分批添加與上述相同量的單寧酸溶液，重復步 驟(3)對單寧酸溶液進行反復轉化，再分離之后再轉化。

2.根據權利要求1所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重復制 備沒食子酸的方法，其特征在于：所述的菌種的活化：將黑曲霉 B1401轉接到察氏斜面培養基后，放入霉菌培養箱中，于30℃條 件下培養70～80h。

3.根據權利要求1或2所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重 復制備沒食子酸的方法，其特征在于：所述的生產菌孢子懸浮液 的制備：將經活化的試管斜面加入生理鹽水，充分震蕩、稀釋后 制得孢子懸浮液。

4.根據權利要求1所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重復制 備沒食子酸的方法，其特征在于：所述的產酶培養基：6％單寧酸， 2.5％葡萄糖，1％(NH₄)₂SO₄，0.1％MgSO₄·7H₂O，0.1％NaNO₃，0.1％ K₂HPO₄·3H₂O，pH值5.0，其中百分比均為w/v。

5.根據權利要求1所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重復制 備沒食子酸的方法，其特征在于：所述的載體材料的處理：將絲 瓜瓤狀的聚酯纖維材料剪成立方塊，經鹽酸浸泡洗滌,后經氫氧化 鈉洗滌，最后用蒸餾水徹底洗至中性后，烘干備用。

6.根據權利要求1或5所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重 復制備沒食子酸的方法，其特征在于：所述的固定化細胞的制備： 取處理后的載體材料，投入經滅菌后產酶培養基中，按體積比 2％～2.5％的比例接入生產菌的孢子懸浮液，在轉速160～180r/min， 溫度35℃的條件下進行產酶培養72～84h。

7.根據權利要求1或6所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重 復制備沒食子酸的方法，其特征在于：所述的步驟(3)中的反應 條件為：將經發酵產酶好的固定化菌株溶液，分批添加總量為 18％～20％的單寧酸，反應轉速140～160r/min，反應溫度35℃，pH 維持在4.0～5.0的條件下，反應44～48h。

8.根據權利要求4所述的一種固定化菌體生物法轉化單寧酸重復制 備沒食子酸的方法，其特征在于：將轉化好的發酵液進行固定化 菌體與發酵液分離，重新在固定化菌體中分批添加18％～20％的單 寧酸溶液，在140～160r/min，35℃，pH4.0～5.0的條件下，反應 44～48h后，再分離后再多次轉化。