[發(fā)明專利]利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610248091.X
• 申請(qǐng)日: 2016-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN105734153A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫子奎;王鋒;丁方美;李嫦娥;方婉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海派森諾生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 吳澤群

1.一種利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1、待測(cè)植物樣品基因組DNA提??；

S2、以待測(cè)植物樣品基因組DNA為模板，用針對(duì)rbcL基因序列設(shè)計(jì)的引物和/或針對(duì)matK基因序列設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

S3、回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，獲得目的DNA；

S4、利用基于Sanger雙脫氧鏈終止法對(duì)所述目的DNA進(jìn)行測(cè)序；將測(cè)序結(jié)果與公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)同源性將待測(cè)植物鑒定到屬或種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法，其特征在于，步驟S2中，所述針對(duì)rbcL基因序列設(shè)計(jì)的引物包括如SEQIDNO.1所示的正向引物和如SEQIDNO.2所示的反向引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法，其特征在于，步驟S2中，所述針對(duì)matK基因序列設(shè)計(jì)的引物包括如SEQIDNO.3所示的正向引物和如SEQIDNO.4所示的反向引物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法，其特征在于，步驟S2中，所述PCR擴(kuò)增中，每50.0ul擴(kuò)增反應(yīng)體系包括：基因組DNA1.0ul，含2.5mMMg2+的10×Buffer5.0ul，5u/μL的Taq聚合酶1.0ul，10mM的dNTP1.0ul，10uM的正向引物1.5ul，10uM的反向引物1.5ul，ddH2O39.0ul。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法，其特征在于，步驟S2中，所述PCR擴(kuò)增中，PCR反應(yīng)參數(shù)為：預(yù)變性95℃，5min；變性95℃，30s；退火55℃，45s；延伸72℃，1min30s；終延伸72℃，7m；循環(huán)數(shù)45。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因?qū)χ参镞M(jìn)行種屬鑒定的方法，其特征在于，步驟S3中，所述回收是用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒進(jìn)行回收。