[發明專利]基于微衛星標記Thymall-01的新疆北極茴魚檢測引物和方法

有效

• 申請號: 201610241439.2
• 申請日: 2016-04-19
• 公開（公告）號: CN105779616B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 劉云國
• 申請（專利權）人: 新疆大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一組利用微衛星標記Thymall-01對新疆北極茴魚基因型進行檢測的引物，其特征在于，

其中所述的引物為序列：

正鏈5’-TCTGGTCCTGGTGGAATTGT-3’，

負鏈5’-TGTAGTCATTCCTCCCCGTC-3’，使用該引物時的退火溫度為58℃。

2.利用微衛星標記Thymall-01對新疆北極茴魚基因型進行檢測的方法，其特征在于，首先提取新疆北極茴魚肌肉中的基因組DNA并稀釋備用；再利用新疆北極茴魚DNA序列中含有的微衛星核心序列，使用特異性引物對新疆北極茴魚不同個體的基因組DNA進行PCR擴增，對PCR產物進行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，從而確定新疆北極茴魚不同個體在Thymall-01核心序列區的基因型，其中所述的新疆北極茴魚微衛星標記Thymall-01的特異性引物為：

正鏈5’-TCTGGTCCTGGTGGAATTGT-3’，

負鏈5’-TGTAGTCATTCCTCCCCGTC-3’，使用該引物時的退火溫度為58℃。

3.如權利要求2所述的利用微衛星標記Thymall-01對新疆北極茴魚基因型進行檢測的方法，其特征在于，對不同新疆北極茴魚個體的基因組DNA進行的PCR擴增，其加樣參數為：每個PCR反應總體積為25μL，包括100ng新疆北極茴魚基因組DNA；10×PCR Buffer，2.5μL；Mg²⁺ 1.5 mmol/L；Taq酶1u；dNTP 0.1mmol/L；權利要求2中的特異性引物各10 pmol；最后加ddH₂O至25μL；設置PCR儀的程序參數為：94℃變性5min；94℃ 45sec，58℃ 1min，72℃40sec，該反應進行35個循環；72℃延伸5 min，4℃保存。

4.如權利要求2所述的利用微衛星標記Thymall-01對新疆北極茴魚基因型進行檢測的方法，其特征在于，對PCR產物進行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測的步驟：將PCR產物在8％的變性聚丙烯酰胺凝膠中以15W恒功率電泳1.5小時進行分離, 以10％的冰醋酸溶液浸泡30min，然后蒸餾水沖洗5min，再以0.1％的硝酸銀溶液浸泡30min，用3％的碳酸鈉溶液顯色5min，最后用10％的冰醋酸溶液浸泡5min。

5.權利要求2-4中任意一項所述的方法在新疆北極茴魚群體間遺傳多態性圖譜構建上的應用。