[發(fā)明專利]一種黃綠木霉菌株及用其制備滇丁香煙用香料的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610239786.1
• 申請日: 2016-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN105733960B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾熠程;段焰青;劉強(qiáng);付磊;陳興;雷聲;黨立志
• 申請（專利權(quán)）人: 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C11B9/00;C12R1/885
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 謝嘉

本發(fā)明公開了一種黃綠木霉菌株及用其制備滇丁香煙用香料的方法。所述菌株為黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM?04 CGMCC No.10839，具有產(chǎn)纖維素酶，進(jìn)而促進(jìn)纖維素分解成寡糖或單糖的能力。將菌株通過活化、發(fā)酵、過濾、透析制得纖維素酶粗酶液，用于發(fā)酵滇丁香，再經(jīng)提取、過濾、減壓濃縮制成煙用香料。HLMM?04菌株的最適產(chǎn)酶條件為培養(yǎng)基初始pH為6.5，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間為5d。卷煙加香結(jié)果表明，所制備的香料雜氣和刺激性減少，具有改善喉部舒適性的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵及其應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一株黃綠木霉新菌株HLMM-04，同時(shí)，本發(fā)明還涉及利用該菌株制備滇丁香煙用香料的方法。

背景技術(shù)

加香加料是卷煙工藝中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是有效提升卷煙抽吸品質(zhì)，形成卷煙特有風(fēng)格的有效手段之一。目前我國煙草中添加的煙用香料大多是采用傳統(tǒng)方法萃取再加以調(diào)配所得，雖然生產(chǎn)操作簡單，但也存在香氣單調(diào)、改善卷煙抽吸效果不明顯等缺點(diǎn)。利用微生物對(duì)香原料進(jìn)行發(fā)酵可以增加傳統(tǒng)提取香料中多種香氣物質(zhì)的含量，提升香氣豐富性，進(jìn)而生產(chǎn)出香氣豐富、高品質(zhì)的卷煙，滿足消費(fèi)者對(duì)卷煙品質(zhì)的要求。

滇丁香(Luculia pinceana Hook.)，又稱藏丁香、丁香葉、丁香、丁香花葉，為常綠灌木或小喬木，花、果期3-11月。煎湯內(nèi)服，具有止咳化痰等功效。主治咳嗽、百日咳、慢性支氣管炎等。

木霉菌(Trichoderma spp.)廣泛分布于自然界，在腐木、種籽、植物殘?bào)w、有機(jī)肥、土壤和空氣中尤多。木霉菌生長營養(yǎng)要求簡單，生長速度快，對(duì)于工業(yè)化生產(chǎn)十分有利。黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)為木霉屬的一種，作為一種重要的生防因子，對(duì)植物病原的拮抗作用具有廣譜性、多制性，還能產(chǎn)生多種酶類分解土壤中的動(dòng)植物殘?bào)w，增加土壤肥力。已有對(duì)黃綠木霉的報(bào)道多集中在土壤改良、生物防治及生物肥料等方面。現(xiàn)有技術(shù)中尚未見將黃綠木霉用于滇丁香發(fā)酵制備煙用香料的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一株黃綠木霉新菌株，該菌株具有產(chǎn)纖維素酶，進(jìn)而促進(jìn)纖維素分解成寡糖或單糖的能力。

本發(fā)明的目的還在于提供一種利用該菌株發(fā)酵滇丁香制備煙用香料的方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。

除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。

一種黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM-04菌株，CGMCC No.10839，其具有產(chǎn)纖維素酶，進(jìn)而促進(jìn)纖維素分解成寡糖或單糖的能力。

利用所述菌株制備煙用香料的方法，包括以下步驟：

(1)將黃綠木霉HLMM-04CGMCC No.10839菌株活化兩次后，接種于裝有200mL PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在20～35℃，180rpm下發(fā)酵培養(yǎng)1～7d；所述的PDA液體培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，補(bǔ)蒸餾水至1L，pH5.5～8.5，115℃高壓滅菌15min；

(2)發(fā)酵液過濾去除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80％飽和度，4℃下靜置過夜，離心收集沉淀物并溶于2mL緩沖液中，再用緩沖液進(jìn)行透析，得到粗酶液；所述的緩沖液為：0.02mol/L Na₂HPO₄-NaH₂PO₄，pH 7.3；

(3)將滇丁香枝葉去污洗凈，破碎后加入兩倍重量的水，混合均勻，調(diào)pH至6.0；加入黃綠木霉HLMM-04粗酶液，發(fā)酵，粗酶液添加量為滇丁香質(zhì)量的20％，發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵時(shí)間3h；回流提取3h，過濾除渣，將上清液減壓濃縮，即得所需煙用香料。

進(jìn)一步的，為防止香料變質(zhì)，按煙用香料重量的5％添加丙二醇。