[發明專利]一種黃綠木霉菌株及用其制備滇丁香煙用香料的方法

有效

• 申請號: 201610239786.1
• 申請日: 2016-04-18
• 公開（公告）號: CN105733960B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 曾熠程;段焰青;劉強;付磊;陳興;雷聲;黨立志
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C11B9/00;C12R1/885
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 謝嘉

1.一種制備滇丁香煙用香料的方法，包括以下步驟：

(1)將保藏編號為CGMCC No.10839的黃綠木霉HLMM-04(Trichoderma aureoviride)菌株活化兩次后，接種于裝有200mL PDA液體培養基的三角瓶中，在20～35℃，180rpm下發酵培養1～7d；所述的PDA液體培養基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，補蒸餾水至1L，pH5.5～8.5，115℃高壓滅菌15min；所述的黃綠木霉HLMM-04 CGMCC No.10839菌株，具有產纖維素酶，進而促進纖維素分解成寡糖或單糖的能力；

(2)發酵液過濾去除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80％飽和度，4℃下靜置過夜，離心收集沉淀物并溶于2mL緩沖液中，再用緩沖液進行透析，得到粗酶液；所述的緩沖液為：0.02mol/L Na₂HPO₄-NaH₂PO₄，pH 7.3；

(3)將滇丁香枝葉去污洗凈，破碎后加入兩倍重量的水，混合均勻，調pH至6.0；加入黃綠木霉HLMM-04粗酶液，發酵，粗酶液添加量為滇丁香質量的20％，發酵溫度為30℃，發酵時間3h；回流提取3h，過濾除渣，將上清液減壓濃縮，即得所需煙用香料。

2.根據權利要求1所述的制備滇丁香煙用香料的方法，其特征在于：按煙用香料重量的5％添加丙二醇。

3.根據權利要求1所述的制備滇丁香煙用香料的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的發酵培養條件為初始pH 6.5，培養溫度28℃，培養時間5d。