[發(fā)明專利]一種高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610239243.X
• 申請日: 2016-04-18
• 公開（公告）號: CN105823871B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊勇;劉永雙
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州新賽美生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11411
• 代理人: 劉剛

1.一種高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液，其特征在于，包括以下各組分：

聚乙烯醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％-0.4％；核糖的濃度為10-100mM；檸檬酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1-0.5％；乙二酸四乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2-0.6％；高硼酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01-0.05％；TMB的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01-0.05％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液，其特征在于，包括以下各組分：

聚乙烯醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％；核糖的濃度為10mM；檸檬酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％；乙二酸四乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2％；高硼酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01％；TMB的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液，其特征在于，包括以下各組分：

聚乙烯醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4％；核糖的濃度為100mM；檸檬酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％；乙二酸四乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6％；高硼酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％；TMB的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液，其特征在于，包括以下各組分：

聚乙烯醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25％；核糖的濃度為75mM；檸檬酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.21％；乙二酸四乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.42％；高硼酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.03％；TMB的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.025％。

5.一種權(quán)利要求1～4任一所述的高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)制備含TMB的N-甲基吡咯烷酮溶液：取20ml N-甲基吡咯烷酮為溶劑，緩慢加入0.1g-0.5g的TMB，在磁力攪拌器上攪拌均勻使其充分溶解；

(2)在1000ml的燒杯中，加入800ml雙蒸水，緩慢加入1-4g的聚乙烯醇，加入核糖10-100mM，加入檸檬酸1-5g；加入乙二酸四乙酸2-6g，加入高硼酸鈉0.1-0.5g，攪拌使其充分溶解；

(3)將含TMB的N-甲基吡咯烷酮溶液加入到上述1000ml燒杯中，充分?jǐn)嚢杈鶆?，定容?000ml；經(jīng)0.45um的濾膜過濾，獲得均一的溶液，保存在棕色的塑料瓶中，密封避光保存在2-8℃環(huán)境下。

6.一種權(quán)利要求1～4任一所述的高效穩(wěn)定的單組份酶聯(lián)免疫顯色液的使用方法，具體包括以下步驟：

(1)待ELISA實驗加入HRP結(jié)合物后，且溫育一段時間，清洗3次ELISA板之后，每孔加入100ul上述TMB顯色液；

(2)根據(jù)反應(yīng)體系避光孵育5-30分鐘；

(3)每孔加入50ul反應(yīng)終止液終止

(4)在波長450nm測定吸光度。