[發明專利]一種H9亞型禽流感DNA疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201610237685.0
• 申請日: 2016-04-14
• 公開（公告）號: CN105770883A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 焦培榮;廖明;宋慧
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K48/00;A61P31/16;C12N15/85;C12N15/66
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

技術領域

本發明涉及DNA疫苗制備領域，具體為一種H9亞型禽流感DNA疫苗及其制備方法。

背景技術

在1966年，從北美的火雞體內分離出了世界首例H9N2亞型禽流感(AIV)，自此之 后，該亞型AIV呈爆炸式在世界各地擴散開來，感染包括雞和火雞以內的多種鳥類，并在多 地出現廣泛流行。我國于1994年首次在廣東地區的雞場內分離到了H9N2亞型AIV。隨后， H9N2亞型AIV就頻繁出現在我國各地的家禽與野鳥中，逐漸形成大范圍流行及反復感染的 態勢。1996到1998年，H9N2亞型AIV引起第一次全國大流行，而后因為H9N2亞型AIV滅活疫苗 在全國大面積的免疫接種，其才得到有效控制。在2010到2011年，因傳統疫苗保護效力的大 幅度下降，致使全國各地免疫失敗病例頻發，最終導致了H9N2亞型AIV的第二次全國大流 行，其中損失最嚴重的為商品肉雞。

從我國首次確診H9N2亞型禽流感到現在，在這二十多年里，H9N2亞型禽流感病毒 不斷擴散到全國各地的同時，其病毒基因也在不斷的發生變異和重組，造成了H9N2亞型禽 流感抗原的不斷變異與其他亞型新流感病毒的不斷出現，這給作為控制流感最重要措施的 疫苗免疫接種帶來了巨大的壓力。疫苗株與流行株抗原無法匹配造成免疫失敗的現象不斷 發生，這促使著疫苗的更新換代，但是更為嚴重的是，越來越多的H9N2亞型禽流感病毒在疫 苗免疫壓力下出現了位點漂移、點突變和基因重排等免疫逃避現象，這又加快了疫苗更新 換代的頻率。這種惡性循環已經給我國的家禽養殖業造成了嚴重的經濟損失，因此開發出 新型疫苗的任務變得十分緊迫。

核酸疫苗(nucleicacidvaccine)，又稱基因疫苗，可以分為DNA疫苗和RNA疫苗。 其中DNA疫苗是將可編碼抗原蛋白的外源性DNA直接導入被免疫動物體細胞內，利用宿主細 胞的表達系統合成該種抗原蛋白，誘導宿主免疫體系產生針對該抗原蛋白的免疫應答，從 而使宿主擁有免疫保護力。它是20世紀90年代從基因治療研究領域延伸而來的一種新型免 疫制劑，到目前為止已有二十多年的研究歷史。最初的研究表明，將可表達人生長激素基因 的質粒導入小鼠表皮細胞一段時間后，在小鼠血清中檢測到了抗人生長激素的特異性抗 體，并在加強免疫過程中抗體滴度得到提高，此研究為新型疫苗開發提供了新思路，并誕生 出來基因免疫的概念。隨后，世界各地的科研人員開始不斷進行DNA疫苗的動物免疫保護試 驗，得到的數據均顯示DNA疫苗有良好的免疫效果。有研究人員將帶有編碼流感病毒核心蛋 白的基因的重組表達質粒載體注入小鼠肌肉中后，刺激小鼠產生了對抗流感病毒的免疫保 護。

DNA疫苗作為一種新型疫苗，有著其他疫苗無法比擬的眾多優點。

⑴DNA疫苗攜帶的抗原基因在宿主細胞內表達抗原蛋白，可同時通過MHCⅠ類分子 和MHCⅡ類分子途徑呈遞給免疫系統，誘導宿主機體同時產生細胞和體液免疫應答。

⑵DNA疫苗通過在宿主體內不斷表達抗原蛋白刺激宿主產生持久免疫應答，甚至 終身免疫應答。

⑶DNA疫苗對同亞型不同毒株的交叉保護作用好，能夠避免免疫逃逸現象。

⑷DNA疫苗攜帶的只是單獨基因片段，與全病毒滅活苗和弱毒疫苗相比，沒有毒力 殘留或恢復的可能性，因此不存在潛在的致病危險。

⑸因抗原蛋白基因和質粒載體均沒有免疫原性，臨床中不會產生排斥現象，也可 多類核酸疫苗可聯合免疫，制備多價核酸疫苗。

⑹生產成本低廉。DNA疫苗是有含有抗原基因的表達載體組成，生產只需細菌的大 量繁殖。

⑺穩定性好，儲存方便耐運輸。質粒可制成干粉，在室溫環境中的穩定性好，無需 冷藏等處理。

⑻使用方便。干粉狀成品使用時直接用水溶解即可，而且免疫可以選擇多種途徑 接種。

⑼DNA疫苗是在宿主細胞內表達抗原蛋白，因此可用于帶有母源抗體的嬰幼兒或 幼齡動物。

⑽DNA疫苗接種后的副反應出現較少，如：紅腫，短暫性疼痛，發熱等。