[發(fā)明專利]一種超敏免疫檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610235683.8
• 申請日: 2016-04-15
• 公開（公告）號: CN105779609A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 上海伊麗薩生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種超敏免疫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備DNA偶聯(lián)的檢測抗體：設(shè)計DNA模板，并進(jìn)行生物素化；合成光裂解基團，并連接 至DNA模板一端，再將所得模板DNA的光裂解基團一端偶聯(lián)到檢測抗體上；根據(jù)所述DNA模板 設(shè)計定量PCR引物及熒光探針；

(2)ELISA步驟：依次進(jìn)行包被、封閉之后，先對待測樣品進(jìn)行溫育，再加入所得DNA偶聯(lián) 的檢測抗體，進(jìn)行溫育；

(3)定量PCR：用光照射板孔使DNA模板與檢測抗體斷裂脫離，加入DNA-抗體分離液；混 勻后轉(zhuǎn)至定量PCR板，再加入PCR混合物，進(jìn)行PCR擴增，對擴增產(chǎn)物進(jìn)行歸納分析，即可。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：所述光裂解基團為生物素胞 嘧啶雙賴氨酸二肽，分子結(jié)構(gòu)如式I所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(2)涉及洗板工序所用 洗液為含0.1wt％Tween-20的PBS緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(2)中的封閉過程所用 封閉液包括10wt％rabbitIgG、0.035wt％Brij、20mmol/LTris、150mmol/LNaCl，其pH為 7.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(3)所述DNA-抗體分離 液包括100mmol/LCAPSO、1mol/LNaCl，其pH為10.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(3)所述光的波長為300 ～350nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(3)所述光的波長為 320nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(3)所述PCR混合物包 括：終濃度0.2μmol/L的dNTP和DNA聚合酶，1μLDNA洗脫液、7.5pmol上游引物、7.5pmol下游 引物、6pmol熒光探針，補無核酸酶水至20μL。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超敏免疫檢測方法，其特征在于：步驟(3)所述PCR擴增程序 為：95℃3min，40個循環(huán)的95℃30sec、65℃1min。