[發明專利]基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法

有效

• 申請號: 201610235638.2
• 申請日: 2016-04-15
• 公開（公告）號: CN105785048B
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 田志新
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將兩組不同生理或病理條件的整體蛋白分別作為控制組與疾病組，分別進行賴氨酸ε-氨基及N端氨基全部同重標記，分別標記為-N(C₅H₁₁O₂CH₂)₂和-N(C₅H₁₁SCH₂)₂，其單個標記后氨基的質量差異為0.017759Da；

(2)同重標記后兩組蛋白按等比例混合進行高分辨質譜和串級質譜分析得到一個數據組；

(3)對數據組進行定性、定量數據庫搜索，得到蛋白質的ID及疾病組每一個蛋白質相對于控制組的相對比例，即疾病條件下所有蛋白的上調或下調情況，上調或下調倍數最大的蛋白即為與該疾病發生相關的蛋白。

2.根據權利要求1所述的一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，步驟(1)中，控制組蛋白或疾病組蛋白，一組蛋白質用氰基硼氫化鈉和4-(甲氧基甲氧基)丁醛標記，另一組蛋白質用氰基硼氫化鈉和5-(甲硫基)戊醛標記。

3.根據權利要求2所述的一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，步驟(1)中進行同重標記的反應過程和條件如下：蛋白溶解在乙酸鈉緩沖溶液后，加入4-(甲氧基甲氧基)丁醛或5-(甲硫基)戊醛，在攪拌條件下加入氰基硼氫化鈉溶液，室溫反應1小時后，用氨水淬滅。

4.根據權利要求3所述的一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，所述的乙酸鈉緩沖溶液為100mmol/L，pH為5-6。

5.根據權利要求3所述的一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，所述的4-(甲氧基甲氧基)丁醛或5-(甲硫基)戊醛溶液質量分數為4％(w/w)。

6.根據權利要求3所述的一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，所述的氨水溶液體積分數為4％(v/v)。

7.根據權利要求1所述的一種基于輕同位素近同重標記的整體蛋白質定量分析方法，其特征在于，步驟(2)所述的等比例混合指：按照控制組與疾病組的重量、體積或摩爾量以1:1比例進行混合。