[發明專利]Slit2D2-嵌合抗原受體及其應用

有效

• 申請號: 201610235109.2
• 申請日: 2016-04-15
• 公開（公告）號: CN107298715B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 李華順;董寧;王保壘;任寶永
• 申請（專利權）人: 阿思科力（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京布瑞知識產權代理有限公司 11505
• 代理人: 張丹

本發明提供了一種嵌合抗原受體(CAR)及編碼所述CAR的基因，所述CAR包括能夠結合抗原的胞外結構域、跨膜結構域和胞內免疫共刺激分子，其中胞外結構域包括Slit2蛋白的D2結構域。此外，本發明還提供了一種嵌合抗體表達細胞，將編碼所述CAR的基因引入細胞中，從而在細胞表面表達所述CAR。本發明所述的嵌合抗原受體或嵌合抗原受體表達細胞可作為細胞藥物用于腫瘤類疾病的治療。采用本發明嵌合抗原受體用于改造細胞尤其是T細胞，使改造后的T細胞能夠特異性識別和殺傷腫瘤，且具備更高效的腫瘤殺傷活性。

技術領域

本發明涉及腫瘤治療藥物領域，尤其涉及Slit2D2-嵌合抗原受體在預防和/或治療Robo1高表達腫瘤的藥物中的應用。

背景技術

人體的T淋巴細胞是通過其表面的T細胞受體來識別靶細胞的，這一識別具有特異性，即某一個T淋巴細胞只識別具有特定抗原的靶細胞，而且這種特定的抗原是在細胞內加工后，在特殊分子的作用下呈遞給T淋巴細胞的。這種起抗原呈遞作用的分子或者存在于抗原呈遞細胞表面或者存在于靶細胞表面。至少有兩方面的因素導致體內的T淋巴細胞不能很好地識別癌細胞：(1)癌細胞下調抗原呈遞分子的表達，(2)被呈遞的抗原與T細胞受體親和力很弱。雖然癌癥患者體內存在癌細胞高度特異性的T淋巴細胞，但是數量太少起不到治療癌癥的作用。基于這種情況，科學家提出了構建嵌合T細胞受體(現在一般稱為嵌合抗原受體)的概念。嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor，CAR)主要由兩部分構成，一端位于細胞外能夠特異性識別癌細胞表面的某一抗原，另一端位于胞內含有信號激活元件(如T細胞受體的Zeta鏈)，起傳遞信號激活T細胞的作用。這樣表達CAR的T淋巴細胞(CART細胞)就能避免T細胞受體識別靶細胞的限制，從而起到靶向癌細胞的殺傷作用。

目前，CART治療的臨床試驗正在迅速增長，其中大部分是對B細胞惡性腫瘤治療的評估。大多數B細胞惡性腫瘤和正常B細胞表達CD19抗原，但是其他類型的細胞沒有CD19，因此CD19是一個很好的治療靶點。不同的臨床試驗所采用的CD19CART細胞在組成上有一定差別，臨床設計上也不一樣，不過都報道了顯著的效果，復發性或難治性淋巴細胞白血病的治療能達到60-90％的反應率，一部分患者達到持續的緩解，最長的達到2年。雖然目前還不知道CD19CART治療能達到多長時間的持續緩解，但是可以肯定的是這種免疫治療已經給一些患者帶來了以前所達不到的效果。

除了血液系統腫瘤外，研究者們一直在努力將CART治療擴展到實體瘤。臨床試驗顯示，GD2特異性的CART對神經母細胞瘤有一定的療效，而aFR特異性的CART細胞對卵巢癌，CAIX特異性的CART細胞對腎細胞癌和PSMA特異性的CART細胞對前列腺癌沒有顯示出治療效果。賓州大學的Carl H June等在2015年美國臨床腫瘤學年會上報告了用間皮素特異性的CART細胞治療難治的和轉移的胰腺導管腺癌的結果，結果顯示患者對CART細胞具有很好的耐受性，沒有出現細胞因子綜合征，周血中能短時期內檢測到CART細胞，有2名患者病情得到穩定。因此，CART治療實體瘤還處于早期階段，還有許多問題需要解決。

Robo1是實體腫瘤治療潛在新靶點，Robo是一次跨膜的受體蛋白，在哺乳動物中，已經克隆到4個Robo基因。從物種進化的角度看，Robo1，2，3的胞外部分非常的保守，從果蠅到人類都是由5個Ig樣功能區和3個FibronectinIII型重復序列組成。Robos有很短的跨膜區域和一個較長的胞內區；按照序列的保守性，胞內區被劃分為4個更小的區域，分別命名為：CC0，CC1，CC2，CC3。Robo4的結構與其它三個家族成員有很大的不同，它的胞外只有2個Ig樣功能區和3個Fibronectin III型重復序列；胞內也只有CC0和CC2兩個區域。Robos胞外的IgG domains被認為是與配體Slit結合所必需的，較長的胞內區域則和一些重要的信號分子相互作用，參與Slit/Robo下游的信號轉導，從而完成刺激信號由細胞外部到內部骨架的傳遞。目前，已完成Slit2與Robo相互作用區域蛋白質的機構解析，發現Slit2的第二個結構域D2與Robo1的Ig1結合，進而啟動信號傳導。Slit2/Rono1相互作用三級結構解析參見附圖1。