[發明專利]實時熒光定量PCR鑒別蘄蛇的方法在審
| 申請號： | 201610235100.1 | 申請日： | 2016-04-15 |
| 公開（公告）號： | CN105695611A | 公開（公告）日： | 2016-06-22 |
| 發明（設計）人： | 陳學松;黃林杰;羅達龍;黃琳 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295 | 代理人： | 黃為;蔡國 |
| 地址： | 543000 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 實時 熒光 定量 pcr 鑒別 蘄蛇 方法 | ||
1.一種實時熒光定量PCR鑒別蘄蛇的方法，其特征在于，依 次包括下述步驟：
1)引物稀釋放-20℃保存備用；
2)樣品前處理取試樣中段的肌肉組織剪碎，加入研缽中研成粉 末，稱取30mg至2ml滅菌離心管中；
3)模板DNA提取前處理好的樣品，提取DNA,置-20℃保存備 用；
4)配置PCR反應液配
每次PCR實驗需要陰性對照、陽性對照各一個，共制備7管， 按照以上順序依次加入試劑至干凈的離心管中，渦旋振蕩混勻后， 放冰盒上待用；將滅菌的PCR八聯管固定在PCR管盒上，將冰盒 上的反應液離心后，打開蓋子，加至PCR管中，每管18μl；
5)加模板往上述PCR管中加入2μl提取好的DNA，加樣順序 為陰性對照、待檢樣品、陽性對照，敲打PCR管盒，使反應液與 DNA混勻，并經3000轉離心30秒，立即進行PCR反應；
6)熒光定量PCR測試
儀器參數：檢測模式為熒光通道，反應總體積為20μl，染色， 依次選擇“預變性”和“二步擴增”，收集熒光；PCR反應參數： 95℃預變4min，然后進行45個循環：95℃變性30s，63℃復性45s 并采集熒光；
7)結果判定
陰性對照需無Cq值，曲線為直線或輕微斜線，無明顯指數增長 期；
陽性對照需Cq≤30，曲線有明顯指數擴增期；
無Cq值，曲線為直線或輕微斜線，無明顯指數增長期，可報告 樣品陰性；
Cq值≤36，曲線有明顯指數擴增期，可直接報告樣品陽性。
2.根據權利要求1所述的一種實時熒光定量PCR鑒別蘄蛇的 方法，其特征在于，所述的八聯管為0.2ml離心管。
3.根據權利要求1所述的一種實時熒光定量PCR鑒別蘄蛇的 方法，其特征在于，所述的試劑動物組織基因組DNA提取試劑盒購 自廣州迪奧生物科技有限公司。
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