[發明專利]一種海南黃花梨和越南黃花梨的分子鑒定方法和鑒定引物

有效

• 申請號: 201610231958.0
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105695610B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 涂鐵要;李世晉;李永泉;朱成杰;李顯強;劉俊芳;張奠湘
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園;廣東省林業科技推廣總站
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司44001
• 代理人: 劉明星

1.一種海南黃花梨和越南黃花梨的分子鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、對待鑒定樣品進行總DNA提取；

b、PCR擴增：以步驟a提取的總DNA為模板，分別用rpoC2序列的正/反向引物和petD序列的正/反向引物進行PCR擴增，分別得到擴增產物；所述的rpoC2序列的正向引物的堿基序列如SEQ ID NO.5所示，所述的rpoC2序列的反向引物的堿基序列如SEQ ID NO.6所示，所述的petD序列的正向引物的堿基序列如SEQ ID NO.7所示，所述的petD序列的反向引物的堿基序列如SEQ ID NO.8所示；

c、序列比對：將擴增產物測序，然后將測序的rpoC2序列與SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3進行比對，將測序的petD序列與SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4進行比對；如果rpoC2序列與SEQ ID NO.1一致、petD序列與SEQ ID NO.2一致，則該待鑒定樣品為海南黃花梨；如果rpoC2序列與SEQ ID NO.3一致、petD序列與SEQ ID NO.4一致，則該待鑒定樣品為越南黃花梨。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟a的對待鑒定樣品進行總DNA提取后，還用PEG試劑對總DNA進行純化并使DNA終濃度為50-200ng/μl。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟b的PCR擴增的反應體系為：含有Buffer(Mg²⁺plus)5μl、2.5mM的dNTP Mixture 2μl、10μM正向引物0.5μl、10μM反向引物0.5μl、總DNA模板1μl和2.5U/μlHS DNA Polymerase 0.25μl，其余由滅菌蒸餾水補足至25μl；反應條件為：95℃3min；94℃30s，50-52℃30s，72℃1min，35個循環；72℃10min。

4.一種海南黃花梨和越南黃花梨的鑒定引物，其特征在于，所述的鑒定引物包括rpoC2序列的正/反向引物和petD序列的正/反向引物，所述的rpoC2序列的正向引物的堿基序列如SEQ ID NO.5所示，所述的rpoC2序列的反向引物的堿基序列如SEQ ID NO.6所示，所述的petD序列的正向引物的堿基序列如SEQ ID NO.7所示，所述的petD序列的反向引物的堿基序列如SEQ ID NO.8所示。