[發明專利]一種紅鈴蟲抗性基因AQ47檢測引物組、試劑盒及使用方法

有效

• 申請號: 201610227795.9
• 申請日: 2016-04-13
• 公開（公告）號: CN105671194B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 王玲;萬鵬;吳孔明;王金濤;叢勝波;許冬;黃民松
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院植保土肥研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方靈盾知識產權代理有限公司 11506
• 代理人: 鄭利華;熊劍

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，具體而言，本發明涉及一種紅鈴蟲抗性基因 AQ47檢測引物組、試劑盒及使用方法。

背景技術

中國是世界上最大的棉花生產國，自1997年種植轉Bt基因棉花以來，現 全國年種植面積已達550萬hm2，在全世界居第二位，僅次于印度^[1]。根據中棉 所、全國優質棉科技服務項目組2007年對全國16個產棉省(市區)的調查結果， 全國棉花播種品種471個，其中轉基因抗蟲棉157個，占全部品種的33.3％， 其播種面積占總播種面積的66.1％。但值得注意的是，在這些轉基因棉花品種 中，除少數品種外為轉CryIA+CpTI雙價抗蟲棉外，絕大多數品種都為轉單價 Bt基因棉。而且在157個轉基因抗蟲棉品種中，除了其中4個為美國引進品種， 其他幾乎所有品種的基因來源高度集中，基本都是CryIA基因。按照科學規律， 單價抗蟲棉在大田生產上一般只能安全應用8～10年，而轉基因抗蟲棉在中國 種植時間已達10多年，紅鈴蟲對Bt基因產生抗性的風險已越來越大。因此鑒 定田間靶標昆蟲對Bt棉花產生的抗性基因類型、監測其抗性基因頻率的變化， 有助于及時掌握田間種群對Bt棉化的抗性發展情況，研究與制定合理的抗性治 理措施，以延緩害蟲對Bt棉花抗性的產生。

發明內容

紅鈴蟲對Bt蛋白產生抗性目前已知的主要表現為鈣粘蛋白基因突變。從基 因BANK中可以查知，紅鈴蟲的突變類型已達到了23種(見表1)。近年來，我 們從長江流域田間種群中篩選并純化出一個紅鈴蟲Cry1Ac抗性品系，即AQ47 品系(cDNA:KU254194；gDNA:KU254196)，該抗性品系由鈣粘蛋白基因突變導致 紅鈴蟲對Cry1Ac蛋白不敏感。具體突變情況如下：與敏感品系紅鈴蟲(AS)(登 陸號：AY198374.1)相比，AQ47品系紅鈴蟲鈣粘蛋白的基因組序列缺失314個 堿基，缺失部分包含外顯子區域，導致其cDNA序列對應區域，即第4620～第4826 的207個堿基缺失，蛋白序列缺失69個氨基酸殘基，蛋白跨膜結構缺失，無跨 膜區域(參見附圖1)。經基因序列比對表明，該突變基因與基因BANK中已注冊 的紅鈴蟲所有鈣粘蛋白基因均不相同，故其為一種新的抗性基因。

表1基因BANK中已注冊的紅鈴蟲鈣粘蛋白抗性基因種類