[發明專利]一種紅鈴蟲抗性基因AQ47檢測引物組、試劑盒及使用方法

有效

• 申請號: 201610227795.9
• 申請日: 2016-04-13
• 公開（公告）號: CN105671194B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 王玲;萬鵬;吳孔明;王金濤;叢勝波;許冬;黃民松
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院植保土肥研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方靈盾知識產權代理有限公司 11506
• 代理人: 鄭利華;熊劍

1.一種紅鈴蟲抗性基因AQ47檢測引物組，其特征在于，包括下述引物：

上游引物AQ47F：TACTCTCTTCCTCACCTCCTGA，

下游引物AQ47R：CGAGCCGTATTTCGTCATC；

和

上游引物AQ47F2：5'GTCCAAGGTGTGTTGAACCA3'，

下游引物AQ47R：5'CGAGCCGTATTTCGTCATC3'。

2.一種紅鈴蟲抗性基因AQ47檢測試劑盒，其特征在于，包括：由DNA提 取液，PCR反應液，標準陽性模板，陰性質控標準品，權利要求1所述引物組。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述反應液包括LATaq 酶、10×LATaq緩沖液(Mg²⁺Plus)、dNTPs和無菌雙蒸水。

4.權利要求2所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括下述步驟：

1)基因組DNA樣品制備；

2)PCR檢測；

其中所述試劑盒包括DNA提取液，PCR反應液，標準陽性模板，陰性質控 標準品，引物組。

5.根據權利要求4所述的使用方法，其特征在于，包括下述步驟：

1)基因組DNA樣品制備

樣品來源：田間采集到的紅鈴蟲個體，采用單頭提取的方法，即單頭紅鈴 蟲提取的基因組DNA為一個檢測樣本，紅鈴蟲基因組DNA的提取使用天根公司 (TiangenBiotechCo.,Ltd)生產的血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒(離 心柱型)，實驗操作具體步驟按照試劑盒說明書進行；

2)PCR檢測

引物由北京奧科鼎盛生物科技有限公司合成，以提取的基因組DNA為模板， 用設計的引物進行PCR擴增，用引物(AQ47F,AQ47R)和(AQ47F2,AQ47R)進行 PCR反應，其擴增的參數如下：94℃預變性2min；然后為35個循環，循環條 件為：94℃變性30s，接著55℃退火30s，再72℃延伸1min；最后72℃保 溫10min.PCR反應體系為25μL，如下所示：

取出PCR反應所需試劑及保存的DNA樣品于冰上解凍，Taq酶應現用現取， 且用完后需馬上放回-20℃保存，從而延緩酶活性的損失，反應液中各組分的比 例如下：

PCR反應結束后，PCR產物經1.5％瓊脂糖凝膠電泳后，于凝膠成像儀拍攝 電泳圖，根據特異引物擴增的目標條帶判斷是否含有AQ47品系的抗性等位基 因。