[發明專利]一種紅鈴蟲抗性基因AQ65檢測引物組、試劑盒及使用方法

有效

• 申請號: 201610227705.6
• 申請日: 2016-04-13
• 公開（公告）號: CN105671193B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 王玲;萬鵬;吳孔明;王金濤;叢勝波;許冬;黃民松
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院植保土肥研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方靈盾知識產權代理有限公司 11506
• 代理人: 鄭利華;熊劍

本發明涉及一種紅鈴蟲抗性基因AQ65檢測引物組、試劑盒及使用方法，由DNA提取液，PCR反應液，標準陽性模板、紅鈴蟲基因特異性引物、陰性質控標準品組成。可用于檢測紅鈴蟲田間種群中具有上述突變類型的抗性基因個體。

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，具體而言，本發明涉及一種紅鈴蟲抗性基因AQ65檢測引物組、試劑盒及使用方法。

背景技術

中國是世界上最大的棉花生產國，自1997年種植轉Bt基因棉花以來，現全國年種植面積已達550萬hm2，在全世界居第二位，僅次于印度^[1]。根據中棉所、全國優質棉科技服務項目組2007年對全國16個產棉省(市區)的調查結果，全國棉花播種品種471個，其中轉基因抗蟲棉157個，占全部品種的33.3％，其播種面積占總播種面積的66.1％。但值得注意的是，在這些轉基因棉花品種中，除少數品種外為轉CryIA+CpTI雙價抗蟲棉外，絕大多數品種都為轉單價Bt基因棉。而且在157個轉基因抗蟲棉品種中，除了其中4個為美國引進品種，其他幾乎所有品種的基因來源高度集中，基本都是CryIA基因。按照科學規律，單價抗蟲棉在大田生產上一般只能安全應用8～10年，而轉基因抗蟲棉在中國種植時間已達10多年，紅鈴蟲對Bt基因產生抗性的風險已越來越大。因此鑒定田間靶標昆蟲對Bt棉花產生的抗性基因類型、監測其抗性基因頻率的變化，有助于及時掌握田間種群對Bt棉化的抗性發展情況，研究與制定合理的抗性治理措施，以延緩害蟲對Bt棉花抗性的產生。

發明內容

紅鈴蟲對Bt蛋白產生抗性目前已知的主要表現為鈣粘蛋白基因突變。從基因BANK中可以查知，紅鈴蟲的突變類型已達到了23種(見表1)。近年來，我們從長江流域田間種群中篩選并純化出一個紅鈴蟲Cry1Ac抗性品系，即AQ65品系(cDNA:KU254193；gDNA:KU254195)，該抗性品系由鈣粘蛋白基因突變導致紅鈴蟲對Cry1Ac蛋白不敏感。具體突變情況如下：與敏感品系紅鈴蟲(AS)(登陸號：AY198374.1)相比，AQ65品系紅鈴蟲鈣粘蛋白的基因組序列插入284個堿基，導致其cDNA序列第3195～3236、3252～3284、3295～3298的79個堿基缺失，提前引入終止密碼，導致蛋白翻譯提前終止(見圖1)。經基因序列比對表明，該突變基因與基因BANK中已注冊的紅鈴蟲所有鈣粘蛋白基因均不相同，故其為一種新的抗性基因。

表1 基因BANK中已注冊的紅鈴蟲鈣粘蛋白抗性基因種類