[發(fā)明專(zhuān)利]抗BCMA嵌合抗原受體、編碼基因、重組表達(dá)載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610224864.0
• 申請(qǐng)日: 2016-04-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105777911B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祁偉;俞磊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海優(yōu)卡迪生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N15/65;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海順華專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 31203
• 代理人: 顧雯;張星漪

本發(fā)明公開(kāi)了一種抗BCMA嵌合抗原受體、編碼基因、重組表達(dá)載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。該抗BCMA嵌合抗原受體包括包括依次串聯(lián)的包括依次串聯(lián)的CD8 leader嵌合受體信號(hào)肽、BCMA單鏈抗體重鏈VH、Optimal Linker C、BCMA單鏈抗體輕鏈VL、CD8 Hinge嵌合受體鉸鏈、CD8 Transmembrane嵌合受體跨膜區(qū)、CD137嵌合受體共刺激因子，以及TCR嵌合受體T細(xì)胞激活域。此外，還公開(kāi)了該抗BCMA嵌合抗原受體的編碼基因、重組表達(dá)載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。本發(fā)明能顯著提高細(xì)胞因子的分泌、CAR?T細(xì)胞的體外殺傷作用，且臨床治療效果突出。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤免疫治療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗BCMA嵌合抗原受體、編碼基因、重組表達(dá)載體(尤其是一種基于復(fù)制缺陷性重組慢病毒的CAR-T轉(zhuǎn)基因載體)及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤免疫治療的理論基礎(chǔ)是免疫系統(tǒng)具有識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原、調(diào)控機(jī)體攻擊腫瘤細(xì)胞(高度特異性的細(xì)胞溶解)的能力。這個(gè)生物過(guò)程十分復(fù)雜，目前仍處于研究之中。上世紀(jì)90年代，多個(gè)科研小組已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了腫瘤抗原(tμmor antigens)，T淋巴細(xì)胞可以通過(guò)主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)依賴(lài)性方式識(shí)別這些腫瘤抗原。

腫瘤免疫治療通常分為兩類(lèi)，非特異性免疫和特異性免疫。非特異性免疫治療主要包括白細(xì)胞介素-2(interleμkin-2，IL-2)，干擾素α(interferonα，IFN-α)，腫瘤壞死因子(tμmor necrosis factor，TNF-α)，卡介苗等細(xì)胞因子和毒素，過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療等。特異性免疫治療主要是腫瘤疫苗。

1.1腫瘤非特異性免疫治療

非特異性免疫應(yīng)答是與生俱來(lái)的，它的形成并不需要抗原刺激，能廣泛地針對(duì)多種抗原，是免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)，但特異性不強(qiáng)，對(duì)某種特定抗原物質(zhì)往往不能產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的反應(yīng)非特異性的免疫治療。在進(jìn)入臨床試驗(yàn)的多種細(xì)胞因子中，白細(xì)胞介素-2和干擾素應(yīng)用最為廣泛[Rosenberg S A，Lotze M T，Mμμl L M，et al.A progressreport on thetreatment of 157 patients with advanced cancerμsing lymphokine-activatedkiller cells and interleμkin-2orhigh-dose interleμkin-2alone[J].N Engl J Med，1987，316(15):889－897.]。

1.2腫瘤單克隆抗體的免疫治療

近20多年來(lái)單克隆抗體已在腫瘤治療領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。抗腫瘤單抗藥物一般包括兩類(lèi)：一是抗腫瘤單抗，二是抗腫瘤單抗偶聯(lián)物，或稱(chēng)免疫偶聯(lián)物。免疫偶聯(lián)物分子由單抗與“彈頭”藥物兩部分組成，“彈頭”主要包括放射性核素、藥物和毒素，與單抗連接后分別構(gòu)成放射免疫偶聯(lián)物、化學(xué)免疫偶聯(lián)物和免疫毒素。在1997年11月和1998年10月美國(guó)FDA分別通過(guò)了用于臨床腫瘤治療的兩個(gè)單抗—Ritμximab(ritμxan)和Trastμzμmab(herceptin)[Dillman R O.Magic bμllets at last！Finally—approval ofamonoclonal antibody for the treatment of cancer[J].CancerBiother Radiopharm，1997，12:223－225.]。目前認(rèn)為單抗的作用機(jī)制有阻斷作用、信號(hào)傳導(dǎo)作用以及靶向作用等三種作用機(jī)制，沒(méi)有直接的殺傷作用。另外還存在藥理學(xué)方面的問(wèn)題，主要是到達(dá)腫瘤的藥量不足。由于偶聯(lián)物是異體蛋白，會(huì)被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取，有相當(dāng)數(shù)量將積聚于肝、脾和骨髓。偶聯(lián)物是大分子物質(zhì)，通過(guò)毛細(xì)血管內(nèi)皮層及穿透腫瘤細(xì)胞外間隙均受到限制。

1.3腫瘤的過(guò)繼免疫治療