[發明專利]抗BCMA嵌合抗原受體、編碼基因、重組表達載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201610224864.0
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105777911B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 祁偉;俞磊
• 申請（專利權）人: 上海優卡迪生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N15/65;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 顧雯;張星漪

1.一種抗BCMA嵌合抗原受體，包括依次串聯的CD8 leader嵌合受體信號肽、BCMA單鏈抗體重鏈VH、Optimal Linker C、BCMA單鏈抗體輕鏈VL、CD8 Hinge嵌合受體鉸鏈、CD8Transmembrane嵌合受體跨膜區、CD137嵌合受體共刺激因子，以及TCR嵌合受體T細胞激活域；所述抗BCMA嵌合抗原受體的氨基酸序列如SEQ ID NO.50所示。

2.一種抗BCMA嵌合抗原受體，包括依次串聯的CD8 leader嵌合受體信號肽、BCMA單鏈抗體重鏈VH、Optimal Linker C、BCMA單鏈抗體輕鏈VL、CD8 Hinge嵌合受體鉸鏈、CD8Transmembrane嵌合受體跨膜區、CD28嵌合受體共刺激因子、CD137嵌合受體共刺激因子、以及TCR嵌合受體T細胞激活域；所述抗BCMA嵌合抗原受體的氨基酸序列如SEQ ID NO.51所示。

3.編碼權利要求1或2所述的抗BCMA嵌合抗原受體的基因。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53所示。

5.含有權利要求3或4所述的基因的重組表達載體，其特征在于，所述表達載體為慢病毒表達載體，該慢病毒表達載體包括：用于質粒復制的原核復制子pUC Ori序列；用于目的菌株大量擴增的含氨芐青霉素抗性基因AmpR序列；用于增強真核細胞內的復制的病毒復制子SV40 Ori序列，所述病毒復制子SV40Ori序列如SEQ ID NO.3所示；用于慢病毒包裝的慢病毒包裝順式元件；用于真核細胞表達綠色熒光的ZsGreen1綠色熒光蛋白；用于共同轉錄表達蛋白質的IRES核糖體結合序列；用于嵌合抗原受體基因的真核轉錄的人EF1α啟動子；用于組成集識別、傳遞、啟動于一體的二代CAR或三代CAR的如權利要求3或4所述的嵌合抗原受體的編碼基因；用于增強轉基因的表達效率的eWPRE增強型土撥鼠乙肝病毒轉錄后調控元件，所述eWPRE增強型土撥鼠乙肝病毒轉錄后調控元件有6個核苷酸的增強突變，具體為：g.396G>A、g.397C>T、g.398T>C、g.399G>A、g.400A>T、g.411A>T。

6.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述慢病毒包裝順式元件采用第二代慢病毒載體包括：慢病毒5terminal LTR、慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、Gag順式元件、RRE順式元件、env順式元件，以及cPPT順式元件。

7.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述慢病毒包裝順式元件采用第三代慢病毒載體包括：慢病毒5terminal LTR、慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、Gag順式元件、RRE順式元件、env順式元件、cPPT順式元件，以及RSV啟動子。