[發(fā)明專利]一種牛奶中乳果糖的檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610223749.1 | 申請日： | 2016-04-12 |
| 公開（公告）號： | CN105784868B | 公開（公告）日： | 2017-12-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊曉敏;王建軍;孟瑾;鄭小平;何亞斌;高勇興 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海必諾檢測技術(shù)服務(wù)有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 上海泰能知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所31233 | 代理人： | 黃志達,魏峯 |
| 地址： | 200436 上海市閘*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 牛奶 果糖 檢測 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于乳果糖檢測領(lǐng)域，特別涉及一種牛奶中乳果糖的檢測方法。
背景技術(shù)
乳果糖是乳糖在牛奶熱處理過程中的異構(gòu)化產(chǎn)物，是評估牛奶殺菌程度和貯藏時間的一項重要指標，國際奶制品組織(IDF)已建議乳果糖的濃度作為區(qū)別該奶產(chǎn)品是用巴氏法殺菌，超熱處理和已滅菌的指示劑，因此牛奶中乳果糖的準確測定更顯得格外重要。
傳統(tǒng)關(guān)于乳果糖的分析方法有色譜和酶分析這兩種方法，但是由于牛奶中含有較多的乳糖，會影響乳果糖，使得這兩種方法很難進行準確的定量分析。隨著近年來離子色譜技術(shù)的不斷成熟，運用離子色譜測定糖類成為了測定乳果糖的一種新的途徑，但是乳糖和乳果糖的分離依然是一道難題，其對淋洗液濃度等條件的要求相當苛刻。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種牛奶中乳果糖的檢測方法，該方法能夠準確、靈敏，操作簡便地測定牛奶中乳果糖的含量。
本發(fā)明的一種牛奶中乳果糖的檢測方法，包括：
(1)取牛奶樣品用水稀釋后，依次加入亞鐵氰化鉀溶液和硫酸鋅溶液，靜置，過濾，收集濾液；加入β-D-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，混勻后加蓋，于50～60℃恒溫培養(yǎng)1～2h；然后依次加入葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)、正辛醇、氫氧化鈉溶液、過氧化氫和過氧化氫酶，于45～50℃恒溫培養(yǎng)3～4h；冷卻后定容，過濾，凈化，收集濾液作為待測液；
(2)采用具有安培檢測器的離子色譜儀分析步驟(1)中的待測液，得到乳果糖的含量。
所述步驟(1)中的牛奶樣品為鮮牛乳或牛奶的添加物(如高鈣牛奶、學(xué)生營養(yǎng)強化奶等)。
所述步驟(1)中的亞鐵氰化鉀溶液的濃度為200g/L，與牛奶樣品的體積比為1:5；硫酸鋅溶液的濃度為200g/L，與牛奶樣品的體積比為1:5。
所述步驟(1)中加入硫酸鋅溶液后加入緩沖液[0.34mol/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4)+0.07mol/L磷酸二氫鈉(NaH2PO4)，pH＝7.5]調(diào)整溶液pH值至7.5；加入β-D-半乳糖苷酶恒溫培養(yǎng)后加入緩沖液[0.75mol/L三乙醇胺鹽酸鹽(C6H15NO3·HCl)+0.01mol/L硫酸鎂(MgSO4·7H2O)，pH＝7.6]調(diào)整溶液pH值至7.6。
所述步驟(1)中的β-D-半乳糖苷酶與濾液的體積比為0.1:5。
所述步驟(1)中的葡萄糖氧化酶、氫氧化鈉溶液、過氧化氫、過氧化氫酶與濾液的體積比為0.1:0.5:0.05:0.1:5。
所述步驟(1)中的過濾采用0.45μm水相濾膜過濾；凈化采用C18小柱凈化。
所述步驟(2)中的離子色譜儀分析的條件為：
檢測器：ED40電化學(xué)檢測器，參比電極為Ag/AgCl、Au電極；
色譜柱：CarboPac PA10色譜分離柱；
流動相：超純水；
流速：1.0mL/min；
淋洗液：10mmol/L KOH；
進樣體積：25μL。
所述色譜柱的規(guī)格為：長度250mm×內(nèi)徑4mm。
所述步驟(2)中的乳果糖的含量采用外標法定量。
本發(fā)明中采用碳水化合物色譜分析柱CarboPac PA10(4mm*250mm)分離各個不同組分的糖。
本發(fā)明通過具有安培檢測器的離子色譜儀分析乳果糖的基本原理是：樣品中的乳糖和乳果糖水解成半乳糖、葡萄糖和果糖后，通過碳水化合物色譜柱分離。基于配體交換反應(yīng)，糖分子上每一個羥基都帶有一個非常弱的負電荷，而端基異構(gòu)碳上所帶的羥基可被去質(zhì)子化，從而帶上一個很強的負電荷。糖分子上的這些負電荷與樹脂表面上的金屬離子的正電荷之間的相互作用使糖被保留，從而達到分離，因此各組份在色譜柱中的保留時間就不同，經(jīng)過一定的柱長后，便彼此分離，按順序離開色譜柱進入檢測器，達到了幾種糖分的有效分離，通過其在色譜柱上的保留時間定性，峰面積定量。通過測得的果糖含量，扣除樣品本底中果糖的含量，可得到乳果糖酶解產(chǎn)生的果糖含量，從而計算得出奶樣中乳果糖的含量。
本發(fā)明用亞鐵氰化鉀和硫酸鋅溶液作為沉淀劑，能有效排除蛋白和脂肪對乳果糖分析的干擾。
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