[發明專利]一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法

在審

• 申請號: 201610223240.7
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105785022A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 羅朝領;董敏;盧榮春
• 申請（專利權）人: 上海凱璟生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558
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技術領域

本發明涉及一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，本發明屬于醫療產品領域。

背景技術

阿爾茨海默綜合癥（AD）是一種起病隱匿的進行性發展的神經系統退行性疾病。AD是老年期最常見疾病之一，世界衛生組織（WHO）估計全球65歲以上老年人群AD的患病率為4%~7%。AD患病率與年齡密切相關，年齡平均每增加6.1歲，患病率升高1倍；在85歲以上老年人群中，AD患病率可高達20%~30%。2001年全球AD患者超過2000萬，估計到2040年，全球AD患者將超過8000萬。自1999年，中國開始進入老齡化社會，與之相對應的，目前中國老年人群AD患病人口已經超過600萬，預計到2050年患病人口將超過2000萬，是世界上AD患病人口最多、增長速度最快的國家。AD是造成老年人失去日常生活能力的最常見疾病，也是導致老年人死亡的第5位病因。AD不僅給患者帶來巨大的痛苦，還給家庭和社會帶來了沉重的精神壓力和醫療、照料負擔。因此，AD已成為影響全球公共健康和社會可持續發展的重大問題。盡管世界各國對AD治療藥物的研發投入了大量人力物力，仍未能研發出延緩或阻止AD進展的藥物。因此早期診斷治療是防治AD的關鍵時期。

目前阿爾茲海默綜合癥臨床常用的診斷方法有：1、神經影像學檢查、腦電圖：如計算海馬區神經原纖維纏結和老年斑數，與臨床診斷的符合率可達81%～88%。由于正常老年人也有一定數量的神經原纖維纏結和老年斑，且有同樣的分布，準確率較低，非常耗時而且很昂貴；2、神經心理學測驗：神經心理學測驗是在現代心理測驗基礎上發展起來的用于腦功能評估的一類心理測驗方法。因個體差異較大，準確率較差。對于早期患者，檢出率并不理想；3、基因檢測：通過檢測阿爾茲海默綜合標志性因子，如淀粉樣蛋白前體蛋白基因（APP）、早老素1、2基因（PS1、PS2）等，有簡便、敏感、特異等優點，但需要相應的檢測設備，技術要求高，費用高，難以推廣。4、血液學檢查、腦脊液檢測：主要用于檢測阿爾茲海默綜合癥特異性蛋白，發現存在的伴隨疾病或并發癥、發現潛在的危險因素。目前常用ELISA免疫診斷技術檢測血清中或腦脊液特異性蛋白，具有常規程序冗長費時、不易于推廣、靈敏度低等。因此尋找一種快速、方便攜帶、操作簡單、靈敏度高，對阿爾茲海默綜合癥的診斷和方法學建立具有十分重要的意義。

分裂原激活的蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases，MAPK)家族是非常保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是信號轉導過程中一組主要的信號分子，在發育和疾病發生過程中起重要作用。MAPK家族有4個成員，即細胞外信號調節激酶(extracellularregulatedproteinhnasel/2，ERK1/2)、c-junN端激酶(c-junN-terminalkinase，JNK)、應急激活的蛋白激酶(stressactivatedproteinkinase，SAPK)、P38MAPK/ERK5/BMK1(bigmitogen-activatedproteinkinase，BMKl)。

P38蛋白激酶是由Han等用內毒素刺激哺乳動物(mammal;mammalian)細胞，從中分離純化的酪氨酸磷酸蛋白激酶。P38是MAPK家族控制炎癥反應最重要的成員，它可因生理性應激、脂多糖、滲透性應激和紫外線照射而激活。脂多糖、腫瘤壞死因子(TNF)、血小板激活因子、白細胞介素―1和缺血/再灌注等炎癥刺激，能誘導內源性免疫細胞如單核細胞、內皮細胞和中性粒細胞內的P38激活。P38通路的關鍵酶包括MAPKK類的MKK3、MKK6和MAPKKK類的TAK、ASK、MLK。TAK被TAK結合蛋白(TAB)激活，介導轉化生長因子(TGF―β)的信號轉導。TAK亦可以激活MKK4，進而活化P38。P38激活后發生核轉位，并對許多蛋白激酶和轉錄因子具有磷酸化和激活的作用。

倫敦大學的科學家通過研究發現，MAPKAPK5的血液蛋白的水平在參與者機體中的水平較低，而這些個體均為在10年的研究期間表現出了認知能力的下降。MAPKAPK5血液蛋白的水平可以揭示個體患阿爾茲海默氏癥的風險，可闡明個體輕度認知損傷的發展情況，對于開發有效的干預措施也至關重要。