[發明專利]一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法

在審

• 申請號: 201610223240.7
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105785022A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 羅朝領;董敏;盧榮春
• 申請（專利權）人: 上海凱璟生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558
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1.一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于，本試劑盒包括PVC底板、熒光結合墊、硝酸纖維素膜、樣品墊和吸水墊；所述樣品墊、熒光結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊按水平方向固定于PVC底板上；所述結熒光合墊上有包被的鼠抗人MAPKAPK5單克隆抗體1-納米熒光微球復合物、雞IgY-納米熒光微球復合物；所述的硝酸纖維素膜上有鼠抗人MAPKAPK5單克隆抗體2構成的檢測線和兔抗雞IgY抗體構成的質控線。

2.如權利要求1所述的一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于，所述的納米熒光微球為醛基化紅熒光微球，納米顆粒粒徑為100~200nm，激發波長為365nm，發射波長為612±5nm，表面有醛基基團其含量為0.1~0.5mMol/g。

3.如權利要求1所述的一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于，鼠抗人MAPKAPK5單克隆抗體1和鼠抗人MAPKAPK5單克隆抗體2為MAPKAPK5特異性單抗，識別MAPKAPK5蛋白分子上的2種位點。

4.如權利要求1所述的一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于，將硝酸纖維素酶切成25mm×300mm，貼在PVC底板上；將兔抗雞IgY用PBS稀釋到濃度為1mg/ml，作為C線包被液；將鼠抗人MAPKAPK5單抗2用PBS稀釋到濃度為1mg/ml，作為T線包被液；通過噴膜儀，將T線包被液和C線包被液在硝酸纖維素膜上劃線得到檢測線和質控線，37度烤干，即可得到單克隆抗體包被測試條。

5.如權利要求1所述的一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于納米熒光微球顆粒與鼠抗人MAPKAPK5單抗或雞IgY按照1:1（ul：ug）混合，37度反應2h，制備得到鼠抗人MAPKAPK5單克隆抗體1-納米熒光微球復合物或雞IgY-納米熒光微球復合物。

6.如權利要求5所述的納米熒光微球顆粒與鼠抗人MAPKAPK5單抗偶聯方法是通過納米熒光微球上的醛基與抗體蛋白上的氨基在弱堿環境下通過希夫氏堿基縮合，形成納米熒光微球-CH-NH2-MAPKAPK5抗體復合物；同樣方式形成納米熒光微球-CH-NH2-雞IgY抗體復合物。

7.如權利要求1所述的一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于結合墊的制備：將結合墊切成9mm×300mm細條，將鼠抗人MAPKAPK5單克隆抗體1-納米熒光微球復合物或雞IgY-納米熒光微球復合物按照一定比例混合均勻鋪在結合墊上，放入烘箱37度下烘烤2h。

8.如權利要求1所述的一種檢測阿爾茲海默綜合癥MAPKAPK5的干式免疫熒光試劑盒和制備方法，其特癥在于檢測樣品為血清、血漿、全血、腦脊液、尿液。