[發(fā)明專利]一種黃樟油素型樟樹嫩枝組培繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610223065.1
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105830924B
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安家成;蔡玲;黃金使;李開祥;梁曉靜;丘米;楊素華;黃宏喜
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司45114
• 代理人: 鄒超賢

1.一種黃樟油素型樟樹嫩枝組培繁殖方法，其特征在于：包括外植體選擇、外植體處理、初始芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)工序，采集黃樟油素型樟樹的樹冠外圍生長健壯的當(dāng)年生嫩枝作為外植體，對外植體進(jìn)行修剪、滅菌消毒處理后接種于初始芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中獲取初始芽，再將初始芽接種于增殖培養(yǎng)基中經(jīng)過4-5個(gè)周期增殖培養(yǎng)，形成叢生芽，將叢生芽接入壯芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，最后將高≥2cm的單芽插入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，具體操作步驟如下：

（1）外植體選擇：在至少連續(xù)3天晴朗的氣候里，采集黃樟油素型樟樹的樹冠外圍生長健壯的當(dāng)年生嫩枝作為外植體；

（2）外植體處理：將外植體置于自來水下沖洗10-15 min，然后去除外植體葉片，再將外植體浸泡在體積濃度 0.1%的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽溶液中，控制浸泡時(shí)間15-20 min，最后用純凈水洗凈藥物，將外植體裁成帶至少1個(gè)腋芽，1.5-3cm長的莖段，視莖段木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，對外植體消毒，備用；

（3）初始芽誘導(dǎo)培養(yǎng)：將步驟（2）得到的外植體接種于初始芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，初始芽誘導(dǎo)培養(yǎng)方法為：首先將接種好的外植體置于4-8 ℃的低溫環(huán)境,暗培養(yǎng)8-10 d，再轉(zhuǎn)入溫度22-25 ℃,光照強(qiáng)度1000-2000 lux,光照10-12 h/d的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)40-50 d，初始芽萌發(fā)、生長；所述的初始芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：改良ER培養(yǎng)基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+NAA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L +L-半胱氨酸20mg/L +葉酸10mg/L+VB₂ 15 mg/+瓊脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L；

（4）增殖培養(yǎng)：將高≥1cm的初始芽接入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)方法為：將接種好的初始芽置于溫度25-30 ℃，光照強(qiáng)度2000-3000 lux，光照12-14 h/d的條件下培養(yǎng)，35-40 d轉(zhuǎn)接一次，循環(huán)往復(fù)，經(jīng)4-5個(gè)周期的培養(yǎng)，形成叢生芽；所述的增殖培養(yǎng)基的配方為：改良ER培養(yǎng)基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+NAA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+瓊脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L；

（5）壯芽培養(yǎng)：將步驟（4）得到的叢生芽進(jìn)行切割，4-5顆芽/叢，插入壯芽培養(yǎng)基中，置于溫度25-30 ℃，光照強(qiáng)度4000-7000 lux，光照12-14 h/d的環(huán)境中培養(yǎng)，培養(yǎng)35-40 d，形成壯芽；所述的壯芽培養(yǎng)基的配方為：改良ER培養(yǎng)基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+NAA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+瓊脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L；

（6）生根培養(yǎng)：將步驟（5）得到的高≥2cm的單芽插入常規(guī)的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根；余下小芽叢再次接種于步驟（4）的增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖，然后再重復(fù)步驟（5），循環(huán)往復(fù)，獲得大量壯芽；

以上所述的改良ER培養(yǎng)基的配方為：NH₄NO₃ 1200 mg/L+KNO₃ 1900 mg/L+CaCl₂·2H₂O 440 mg/L+MgSO₄·7H₂O 370 mg/L+KH₂PO₄ 340 mg/L+H₃BO₃ 0.63 mg/L+MnSO₄·4H₂O 22.3 mg/L+ZnSO₄·4H₂O 8.64 mg/L+Na₂MoO₄·H₂O 0.025 mg/L+CuSO₄·5H₂O 0.0025 mg/L+CoCl₂·6H₂O 0.0025 mg/L+FeSO₄ 27.8 mg/L+NaEDTA 37.3 mg/L+肌醇 50 mg/L+煙酸 0.5 mg/L+鹽酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L。