[發明專利]一種消炎片HPLC指紋圖譜構建方法

有效

• 申請號: 201610221616.0
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105911161B
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 白冰;徐建;高麗娟;祁樹賢;赫玉芳;南敏倫;趙昱瑋
• 申請（專利權）人: 吉林修正藥業新藥開發有限公司;修正藥業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 吉林省長春市新時代專利商標代理有限公司22204
• 代理人: 孫國振

1.一種消炎片HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取消炎片，研細，取0.1～0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加沸點為60～90℃的石油醚50～150mL，加熱回流0.5～3小時，棄去石油醚液，藥渣揮去石油醚，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20～70mL，密塞，稱定重量，超聲處理20～40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：分別精密稱取綠原酸、秦皮乙素、黃芩苷、蒙花苷、黃芩素、漢黃芩素對照品適量，精密稱定，以甲醇為溶劑，配制成質量濃度分別為0.05、0.05、0.50、0.05、0.05、0.02mg/mL的混合對照品溶液，過0.45μm的微孔濾膜，取續濾液作為對照品溶液；

(3)測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～20μl，注入高效液相色譜儀，記錄120分鐘內的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得消炎片的指紋圖譜；

其中，高效液相色譜測定的色譜條件為：

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以0.1％甲酸溶液為流動相B，梯度洗脫，流動相A、B的比例變化為：0～30min，7％～10％A；30～45min，10％～15％A；45～60min，15％A；60～70min，15％～25％A；70～80min，25％～35％A；80～90min，35％～45％A；90～100min，45％～55％A；100～110min，55％～65％A；110～115min，65％～7％A；115～120min，7％A； 流速0.5～1.5ml/min，柱溫28～42℃，檢測波長210～350nm；理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于3500。

2.根據權利要求1所述的一種消炎片HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取消炎片，研細，取0.3g，精密稱定，置索氏提取器中，加沸點為60～90℃的石油醚50mL，加熱回流1小時，棄去石油醚液，藥渣揮去石油醚，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：分別精密稱取綠原酸、秦皮乙素、黃芩苷、蒙花苷、黃芩素、漢黃芩素對照品適量，精密稱定，置于同一5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.049、0.052、0.532、0.044、0.045、0.022mg/mL的混合對照品溶液，過0.45μm的微孔濾膜，取續濾液作為對照品溶液；

(3)測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄120分鐘內的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得消炎片的指紋圖譜。

3.根據權利要求2所述的一種消炎片HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：所述高效液相色譜測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為：ACE 5C18-AR250×4.60mm；以乙腈為流動相A，以0.1％甲酸溶液為流動相B，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長321nm，理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于3500。

4.根據權利要求3所述的一種消炎片HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：梯度洗脫過程中，流動相A、B的比例變化為：0～30min，7％～10％A；30～45min，10％～15％A；45～60min，15％A；60～70min，15％～25％A；70～80min，25％～35％A；80～90min，35％～45％A；90～100min，45％～55％A；100～110min，55％～65％A；110～115min，65％～7％A；115～120min，7％A。