[發明專利]高效液相色譜串聯質譜技術檢測唾液中孕酮和睪酮的方法

有效

• 申請號: 201610220196.4
• 申請日: 2016-04-11
• 公開（公告）號: CN105675788B
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 劉勝敏;何健;宋曉濤
• 申請（專利權）人: 北京洛奇臨床檢驗所股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京高文律師事務所11359
• 代理人: 徐江華,趙銳

1.高效液相色譜串聯質譜技術檢測唾液中孕酮和睪酮的方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用高效液相色譜串聯質譜技術檢測經預處理的唾液中孕酮和睪酮，利用高效液相色譜將孕酮和睪酮與雜質分離，再利用同位素內標法定量，以標準品與內標物的濃度比為X軸，標準品與內標物峰面積比為Y軸，建立校準曲線，計算孕酮和睪酮的含量；

(1)具體色譜條件為：

流動相A：體積比為0.05％的甲酸水；

流動相B：甲醇，純度為色譜純；

色譜柱型號：Phenomenex Kinetex-C18，50×2.1mm，2.6μm；

采用梯度洗脫的方式，見表1；

流速為0.2ml/min，柱溫為40℃，進樣體積為20μl；

表1流動相梯度洗脫參數

(2)質譜條件：

在電噴霧電離正離子檢測模式下，采用多反應監測的質譜掃描模式；噴霧電壓為5000V；碰撞氣為6；氣簾氣為10；離子源氣流GS1為50，GS2為50；離子源溫度為500℃；同時監測目標物孕酮m/z 315.3→109.1、睪酮m/z 289.3→109.1、同位素內標d9-孕酮m/z 324.4→100.1；孕酮和睪酮及內標的去簇電壓、碰撞電壓、碰撞能和碰撞池出口電壓參數見表2；

表2孕酮和睪酮及內標的質譜參數

所述經預處理的唾液按照如下方法制備得到：取唾液500μl于2ml離心管中，加入50ng/ml內標溶液10μl，混勻后，加1ml萃取液，渦旋混合5min，13000r/min離心10min，取上清800μl；氮氣吹干，以100μl10％甲醇水復溶，渦旋3min；13000r/min，離心3min，進樣檢測；

所述內標溶液配制：稱取孕酮同位素內標，甲醇溶解；配制1mg/ml的儲備液；以甲醇稀釋至50ng/ml即得實驗所需內標溶液；

所述萃取液為乙酸乙酯；所述氮氣吹干溫度為40～50℃。