[發(fā)明專利]一種核苷磷酸化酶、編碼基因及其高產(chǎn)菌株和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610218675.2
• 申請日: 2016-04-26
• 公開（公告）號: CN105670979B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何冰芳;劉柯;周有治;張勁松;儲建林
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/10;C12N15/54;C12P19/38;C12R1/01
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

1.一種核苷磷酸化酶高產(chǎn)菌株，其分類命名為波茨坦短芽孢桿菌(Brevibacillus borstelensis)LK01，保藏編號為CCTCC NO: M 2015685。

2.一種由權(quán)利要求1所述菌株產(chǎn)生的核苷磷酸化酶，其氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。

3.編碼權(quán)利要求2所述核苷磷酸化酶的基因，所述核苷磷酸化酶基因的序列如SEQ IDNO：1所示。

4.含有權(quán)利要求3所述基因的重組表達載體或重組菌。

5.權(quán)利要求2所述核苷磷酸化酶、權(quán)利要求4所述重組表達載體或重組菌在合成核苷類似物方面的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于：采用含有權(quán)利要求3所述基因的重組菌或所述重組菌的培養(yǎng)物或所述核苷磷酸化酶合成核苷類似物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述應(yīng)用，其特征在于，合成核苷類似物反應(yīng)中，核糖供體為尿苷、2’-脫氧尿苷、胸苷或阿糖尿苷；堿基受體為5-甲基脲嘧啶、胸腺嘧啶、5-氟脲嘧啶、5-氮胞嘧啶或5-氟胞嘧啶；所述核苷類似物為5-甲基尿苷、5-氟尿苷、5-氮胞苷、5-氟胞苷、胸苷、2’-脫氧-5-氟尿苷、2’-脫氧-5-氮胞苷、2’-脫氧-5-氟胞苷、2’-脫氧-5-氟尿苷、2’-脫氧-5-氮胞苷、2’-脫氧-5-氟胞苷、2’-脫氧-5-甲基尿苷、阿糖-5-氟尿苷、阿糖-5-氮胞苷或阿糖-5-氟胞苷。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，反應(yīng)體系含有10～50mM的堿基受體, 20～100mM的核糖供體，0.5～20U/ml核苷磷酸化酶,溶劑為pH4.9～9.2的磷酸緩沖液，反應(yīng)溫度為30～65℃，反應(yīng)時間為1～5h 。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述應(yīng)用，其特征在于所述堿基受體與核糖供體的濃度為1：2～5。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于合成5-氟尿苷時，反應(yīng)體系含有30mM的5-氟脲嘧啶，60mM的尿苷，1.5U/mL核苷磷酸化酶，溶劑為80mM、pH8.0的磷酸緩沖液，反應(yīng)溫度為50℃，反應(yīng)時間為3h。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述應(yīng)用，其特征在于，反應(yīng)體系中還含有0.5-2 mM EDTA。