[發明專利]一種N-脫氧核糖轉移酶、編碼基因及其高產菌株和應用

有效

• 申請號: 201610218673.3
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN105754899B
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 何冰芳;張勁松;周有治;儲建林;劉柯;劉高飛
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C12P19/38;C12P19/40;C12R1/225
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

1.一種N-脫氧核糖轉移酶高產菌株，其分類命名為希氏乳桿菌(Lactobacillus hilgardii)，菌株編號為ZJS01，保藏編號為CCTCC NO :M2015686。

2.一種由權利要求1所述菌株產生的N-脫氧核糖轉移酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO ：2所示。

3.編碼權利要求2所述N-脫氧核糖轉移酶的基因，所述N-脫氧核糖轉移酶編碼基因的序列如SEQ ID NO ：1所示。

4.含有權利要求3所述基因的重組表達載體或重組菌。

5.權利要求2所述N-脫氧核糖轉移酶、權利要求4所述重組表達載體或重組菌在合成脫氧核苷中的應用。

6.根據權利要求5所述應用，其特征在于，采用含有權利要求3所述基因的重組菌或所述重組菌的培養物或所述N-脫氧核糖轉移酶催化合成脫氧核苷。

7.根據權利要求6所述應用，其特征在于，合成脫氧核苷反應中，核糖供體為2'-脫氧尿苷、胸苷、2'-脫氧胞苷或2'-脫氧腺苷，核糖受體為5-氮胞嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤、5-氟尿嘧啶、2,6-氨基嘌呤或尿嘧啶。

8.根據權利要求7所述應用，其特征在于，合成地西他濱時，反應體系含有5~40mM 5-氮胞嘧啶，5~40mM 2'-脫氧尿苷、胸苷、2'-脫氧胞苷或2'-脫氧腺苷，0.5~20 U/mLN-脫氧核糖轉移酶，溶劑為pH5.0~9.0的緩沖溶液，反應溫度為20~55 ℃，反應時間為1~8 h。

9.根據權利要求8所述應用，其特征在于核糖供體與核糖受體的摩爾比為1∶1~1∶4。

10.根據權利要求9所述應用，其特征在于反應體系含有10 mM 5-氮胞嘧啶，10 mM 2'-脫氧尿苷或10 mM胸苷，1 U/mL N-脫氧核糖轉移酶，溶劑為50 mM、 pH5.0的磷酸緩沖液，反應溫度為35 ℃，反應時間為2 h。

11.根據權利要求8所述應用，其特征在于合成5-氟尿苷時，反應體系含有5~40mM 5-氟尿嘧啶，5~40mM 2'-脫氧尿苷、胸苷、2'-脫氧胞苷或2'-脫氧腺苷，0.5~20 U/mLN-脫氧核糖轉移酶，溶劑為pH5.0~9.0的緩沖溶液，反應溫度為20~55 ℃，反應時間為1~8 h。

12.根據權利要求11所述應用，其特征在于反應體系含有10 mM 5-氟尿嘧啶，10 mM2'-脫氧尿苷或10 mM胸苷，1 U/mL N-脫氧核糖轉移酶，溶劑為50 mM、pH5.0的磷酸緩沖液，反應溫度為35 ℃，反應時間為2 h。

13.根據權利要求8所述應用，其特征在于合成2’-脫氧胞苷時，反應體系含有5~40mM胞嘧啶，5~40mM 2'-脫氧尿苷、胸苷、2'-脫氧胞苷或2'-脫氧腺苷，0.5~20 U/mLN-脫氧核糖轉移酶，溶劑為pH5.0~9.0的緩沖溶液，反應溫度為20~55 ℃，反應時間為1~8 h。

14.根據權利要求13所述應用，其特征在于反應體系含有10 mM 胞嘧啶，10 mM 2'-脫氧尿苷或10 mM胸苷，1 U/mL N-脫氧核糖轉移酶，溶劑為50 mM、pH5.0的磷酸緩沖液，反應溫度為35 ℃，反應時間為2 h。