[發明專利]一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法

有效

• 申請號: 201610218315.2
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN105850737B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 蔣淑磊;李志斌;白霄霞;李國松;趙玉芬;李振勤;徐立軍;邊光亞;李燕;趙儒丹;劉星辰
• 申請（專利權）人: 石家莊市農林科學研究院;石家莊市神州花卉研究所有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發明屬于生物育種領域，專用于高山杜鵑“紅粉佳人”染色體倍性育種，特別是涉及一種一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法。

背景技術

高山杜鵑“紅粉佳人”(Rhododendron Delavayi“Cosmopolitan”)杜鵑科杜鵑屬，原產于我國中西部地區，常綠灌木和小喬木，外粉紅內白的復色品種，植株茂密，株型舒展，葉綠色光亮。多倍體育種是一種有效的育種手段，也是植物進化的重要途徑之一。“巨大型”是多倍體最顯著的外部形態特征，表現出莖干粗壯、葉片寬厚、葉面粗糙、葉色加深、花冠大而厚實、花瓣增多、顏色濃艷，此外，還具有延遲某些花卉種類的花期、抗逆性增強等優點，提高花卉的觀賞價值和商品價值。隨著市場對該品種需求越來越多，需要進一步對高山杜鵑植物種質資源進行創新及新品種培育。

發明內容

針對上述技術問題，本發明的目的提供一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍的技術方法，為實現發明的目的，本發明提供以下技術方案：

一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法，包括以下步驟：

(1)將高山杜鵑“紅粉佳人”外植體消毒后轉接到愈傷組織培養基中進行培養，誘導產生愈傷組織；

(2)使用化學試劑秋水仙素處理愈傷組織，實現染色體加倍；

(3)將經過化學試劑秋水仙素處理愈傷組織轉接到不定芽培養基中進行培養；

(4)將分化出的不定芽轉接到增殖培養基中進行增殖培養；

(5)經過增殖培養的健壯良好組培苗接種到生根培養基中進行生根培養；

(6)選擇根系長到2-3cm的生根苗進行煉苗，用草炭土和珍珠巖配成的混合基質；

(7)煉苗移栽后在顯微鏡下進行染色體數目觀察，篩選出染色體加倍后的植株苗。

步驟(1)中所述的外植體消毒的方法：用質量濃度75％的酒精處理外植體30S，用無菌水沖洗4-5遍，再用質量濃度0.1％的氯化汞處理1分鐘；

所述的愈傷組織培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基中添加蔗糖30g、瓊脂粉6.5g、2-ip 6mg，用純凈水定容至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，暗培養，培養時間30天。

步驟(2)具體過程為：愈傷組織經過質量濃度0.05％的秋水仙素處理24h，用無菌水沖洗4次；

步驟(3)中所述的不定芽培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基添加蔗糖30g、瓊脂6.5g、TDZ 0.1mg、2-ip 1mg，定容水至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，光照強度3500Iux，培養時間45天。

步驟(4)中所述的增殖培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基中添加蔗糖30g、瓊脂粉6.5g、2-ip 3mg、NAA 0.5mg，用純凈水定容至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，光照強度3500Iux，培養時間60天。

步驟(5)生根培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM培養基中大量元素減一半，即其中WPM培養基中NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄.7H₂O、KH₂PO₄、KNO₃、K₂SO₄量減少一半，添加蔗糖20g、瓊脂粉6.5g、活性炭1g、IBA0.8mg，用純凈水定容至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，光照強度3500Iux，培養時間90天。

步驟(6)中所述的混合基質，包括重量比為5:1的草炭土和珍珠巖。

步驟(7)具體的過程為：選擇植株的莖尖和根尖，做好切片，在顯微鏡下觀察染色體加倍情況。

本發明提供的一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法，用化學物質秋水仙素處理高山杜鵑“紅粉佳人”愈傷組織從而誘導多倍體，對高山杜鵑植物種質資源進行創新，用于進一步培養新品種，提高觀賞價值。

具體實施方式

結合實施例說明本發明的技術方案，應用化學物質秋水仙素處理高山杜鵑“紅粉佳人”愈傷組織從而誘導多倍體。

其中，1升WPM基本培養基成分為：