[發明專利]一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法

有效

• 申請號: 201610218315.2
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN105850737B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 蔣淑磊;李志斌;白霄霞;李國松;趙玉芬;李振勤;徐立軍;邊光亞;李燕;趙儒丹;劉星辰
• 申請（專利權）人: 石家莊市農林科學研究院;石家莊市神州花卉研究所有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將高山杜鵑“紅粉佳人”外植體消毒后轉接到愈傷組織培養基中進行培養，誘導產生愈傷組織；

所述的外植體消毒的方法：用質量濃度75%的酒精處理外植體30S，用無菌水沖洗4-5遍，再用質量濃度0.1%的氯化汞處理1分鐘；

所述的愈傷組織培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基中添加蔗糖30g、瓊脂粉6.5g、2-ip 6mg，用純凈水定容至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，暗培養，培養時間30天；

其中1升WPM基本培養基成分為：

大量元素：NH₄NO₃ 400mg；(NH₄)₂SO₄ 132mg；MgSO₄·7H₂O 370mg；KH₂PO₄ 170mg；KNO₃400mg；K₂SO₄ 900mg；

鈣鹽：CaCl₂ 96mg；Ca(NO₃)₂·4H₂O 556mg；

微量元素：H₃BO₃ 6.2mg；MnSO₄·H₂O 22.3mg；Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg；CuSO₄·5H₂O 0.025mg；ZnSO₄·7H₂O 8.6mg；

鐵鹽：Na₂-EDTA 37.3mg；FeSO₄·7H₂O 27.8mg；

維生素：肌醇100mg；煙酸0.5mg；鹽酸吡多醇0.5mg；鹽酸硫胺素0.5mg；甘氨酸2mg；

（2）使用化學試劑秋水仙素處理愈傷組織，實現染色體加倍；

具體過程為：愈傷組織經過質量濃度0.05%的秋水仙素處理24h，用無菌水沖洗4次；

（3）選擇質地呈顆粒狀，顏色發紅色的愈傷組織，轉接到不定芽培養基中進行培養；

所述的不定芽培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基添加蔗糖30g、瓊脂6.5g、TDZ 0.1mg、2-ip 1mg，定容水至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，光照強度3500Lux，培養時間45天；

（4）將分化出的不定芽轉接到增殖培養基中進行增殖培養；

所述的增殖培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基中添加蔗糖30g、瓊脂粉6.5g、2-ip 3mg、NAA 0.5mg，用純凈水定容至1升，調整pH值5.4，培養溫度22±2℃，光照強度3500Lux，培養時間60天；

（5）經過增殖培養的健壯良好組培苗接種到生根培養基中進行生根培養；

所述的生根培養基，由以下方法制備所得：230ml的WPM基本培養基中，添加蔗糖20g、瓊脂粉6.5g、活性炭1g、IBA 0.8mg，用純凈水定容至1升，調整pH值5.4；其中WPM培養基中NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、7H₂O、KH₂PO₄、KNO₃、K₂SO₄量減少一半；培養溫度22±2℃，光照強度3500Lux，培養時間90天；

（6）選擇根系長到2-3cm的生根苗進行煉苗，用草炭土和珍珠巖配成的混合基質；

（7）煉苗移栽后在顯微鏡下進行染色體數目觀察，篩選出染色體加倍后的植株苗。

2.根據權利要求1中所述的一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法，其特征在于，步驟（6）中所述的混合基質，包括重量比為5:1的草炭土和珍珠巖。

3.根據權利要求1中所述的一種高山杜鵑“紅粉佳人”染色體加倍方法，其特征在于，步驟（7）具體的過程為：選擇植株的莖尖和根尖，做好切片，在顯微鏡下觀察染色體加倍情況。