[發明專利]一種基于黃牛Angptl8基因單核苷酸多態性的分子育種方法

在審

• 申請號: 201610217640.7
• 申請日: 2016-04-03
• 公開（公告）號: CN105671189A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 馬云;付瑋瑋;李芬;郝瑞杰;李俊雅;陳寧博;黃潔萍;韓爽;劉云云
• 申請（專利權）人: 信陽師范學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種基于黃牛Angptl8基因單 核苷酸多態性的分子育種方法。

背景技術

單核苷酸多態性(SingleNucleotidePolymorphism，SNP)是指基因組DNA 序列中由于單個核苷酸(A/T/C/G)的替換而引起的多態性，通常所說的SNP 包括堿基的替換、插入、缺失以及重復序列拷貝數的變化。在二倍體生物群體 中，SNP理論上可由2個、3個或4個等位基因構成，但實際上3個或4個等 位基因的SNP很罕見，故SNP通常被稱為二等位基因分子標記。根據SNP在 基因組中分布的位置，SNP又可劃分為基因編碼區SNP(cSNP)、基因周邊SNP (pSNP)和基因間SNPs(iSNP)等類型。其中cSNP造成的影響較大，可能 影響到蛋白質的功能。近年來的研究發現，5’側翼區的SNPs，即pSNP對基 因的功能也具有非常重要的調控作用，能夠影響整個基因的轉錄效率。

分子育種，即分子標記輔助選擇育種(MolecularMark-AssistSelection， MAS)，是利用現代分子生物學和傳統遺傳育種相結合的方法，借助DNA分子 標記對遺傳資源或育種材料進行選擇，對畜禽的綜合性狀進行品種改良，實現 新品種的選育。標記輔助選擇主要經歷了三個階段：第一階段是家畜各性狀間 的遺傳分析；第二階段是蛋白質(酶)標記對數量性狀的標記階段；第三個階 段是分子遺傳標記階段。隨著分子標記技術的日漸成熟與豐富，覆蓋整個基因 組的標記越來越多，通過與QTL(quantitativetraitlocus)間的連鎖分析，可間 接實現輔助選擇性狀的目的。SNP作為新的遺傳標記已廣泛應用于基因定位、 克隆、遺傳育種及多樣性的研究。在肉牛育種中，人們期望通過對與生長性狀 有密切相關、并且與數量性狀緊密連鎖的DNA標記進行選擇，達到早期選種 和提高育種值準確性的目的，從而在畜禽育種中獲得較大的研究進展。

目前，主要采用幾種不同的路線來篩別SNP：包括DNA序列測定方法、 PCR-SSCP與DNA測序結合法、AS-PCR方法、引物延伸法、寡核苷酸連接反 應、PCR-RFLP或forced-PCR-RFLP方法等。在這些SNPs檢測技術中，DNA 序列測定法是最為準確的SNP檢測方法，但是其檢測費用昂貴，需要有DNA 測序儀等大型儀器，同時需要非常熟練的技術人員和豐富的經驗，因此該方法 不是一種應用于生產實際的理想SNPs檢測方法；利用PCR-SSCP與DNA測序 結合法檢測SNP可以適當降低檢測費用，但是，PCR-SSCP的實驗過程比較長， 操作比較繁瑣，且實驗過程中存在假陽性問題，所以，也并非理想的SNP檢測 手段；AS-PCR方法作為一種新型的SNPs檢測方法，在未來的應用領域中具有 非常廣闊的前景，但是，該方法需要設計特別的引物，且只能針對特定的基因 位點，同時，檢測過程中還存在誤檢的概率，因此，目前不具有普遍應用的特 點；而引物延伸法和寡核苷酸連接反應技術檢測SNP位點，需要平板讀數儀、 基因芯片、微球陣列技術和質譜儀等檢測平臺，對于一般的分子實驗室來說可 實施性不強。綜上所述，利用PCR-RFLP或forced-PCR-RFLP技術進行SNP 檢測可能是當前檢測SNP最理想的遺傳標記方法。本試驗中的 forced-PCR-RFLP是在發現SNP位點后通過對引物中引入錯配堿基，使之與 SNP位點共同構成酶切位點實現基因分型的一種方法。通過PCR擴增，使用限 制性內切酶進行切割，然后進行瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，就能準確 地鑒別SNPs位點。該方法既具有DNA測序法的準確性，又克服了費用昂貴、 繁瑣操作、假陽性的缺點，是目前可實際應用于生產實踐的方法。