[發明專利]鑒定番茄葉霉病抗性的高通量分子標記及其標記方法與應用

有效

• 申請號: 201610217298.0
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN105624328B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 程琳;張生;國家進;陳福東;張曉燕;董甜;李曉杰;劉岳;王如芳;董靜;于彩玉
• 申請（專利權）人: 山東壽光蔬菜種業集團有限公司;山東省壽光蔬菜產業集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 濰坊正信致遠知識產權代理有限公司 37255
• 代理人: 石譽虎

本發明公開了鑒定番茄葉霉病抗性的高通量分子標記及其標記方法與應用,分子標記為根據目的基因關鍵特異性位點設計引物Cf?5?Al lele?F1、引物Cf?5?Al lele?F2和引物Cf?5?R，利用引物末端堿基特異匹配對目的基因進行基因分型；本發明采用PCR的SNPLine平臺是高通量的分子標記系統，所以能實現操作流程全自動，降低人為誤差；分析通量高，每天可完成五十萬個SNP基因型分型，適合大量樣品同時檢測?；诜讶~霉病抗病基因Cf?5設計的高通量檢測的KASP分子標記，并應用于番茄葉霉病抗病植株的高通量篩選與鑒定，可以大大節約時間和人工成本，提高分子標記輔助選擇的育種效率，對培育抗葉霉病的番茄優良品種、有效控制番茄葉霉病的危害，具有重要意義，也是一項重要的育種方法創新和技術創新。

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，涉及一種用于鑒定番茄葉霉病抗性的高通量分子標記及其標記方法與應用。

背景技術

番茄是我國重要的蔬菜作物之一，在保護地蔬菜生產中占有非常重要的地位。番茄葉霉病(Cladosporium fulvum Cooke)是威脅保護地番茄生產的世界性病害之一，嚴重影響番茄的品質，導致番茄減產，給保護地番茄生產帶來巨大損失。番茄葉霉病于1883年在英國首次被報道，因流傳速度快，短時間內可爆發成災，很快便受到科學家們的高度重視。番茄葉霉病于20世紀30年代在中國臺灣發生后，在我國大陸陸續發生，隨著保護地面積的擴大，其危害性愈發明顯。

近年來，國內外科學家對番茄葉霉病進行了深入而廣泛的研究和探索。研究表明，培育葉霉病抗病品種是防治番茄葉霉病最有效的途徑。隨著研究的進展，多個番茄葉霉病抗病基因已經被鑒定和克隆。其中，Cf-5基因是重要的番茄葉霉病抗病基因之一。在國內外培育的眾多抗病番茄品種中，Cf-5發揮著不可替代的作用。因此，開發Cf-5高效分子標記尤為重要。Wordregen等(1994)利用分子標記作圖在“WSL6”番茄中開發了與Mi和Cf-2/Cf-5緊密連鎖的SCAR分子標記REX-1。但是，Mi基因與Cf-5基因存在一定程度上的重組，嚴重影響分子標記REX-1的選擇準確性。于栓倉等(2005)根據Cf-5基因序列開發了共顯性CAPS分子標記，此標記需要酶切，成本高、實驗程序繁瑣、檢測效率低。

綜上所述，目前，番茄育種仍缺乏準確且高效的Cf-5基因的分子標記，嚴重影響番茄抗葉霉病品種的育種效率。因此，開發準確、高效且實用性強的Cf-5高通量分子標記，對培育抗番茄葉霉病優良品種，有效控制番茄葉霉病的危害，具有重要意義。

發明內容

本發明目的是針對現有技術中需要酶切，成本高，實驗程序繁瑣，檢測效率低等不足與缺陷，提供一種成本低、快捷高效、準確率高的鑒定番茄葉霉病抗性基因Cf-5的高通量分子標記及其標記方法與應用。

本發明技術方案如下：

本發明提供的用于檢測抗性基因Cf-5的高通量分子標記包括引物Cf-5-Al lele-F1、引物Cf-5-Al lele-F2和引物Cf-5-R。引物為包含以下序列的引物，序列如下：

Cf-5-Al lele-F1：

5’–GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGCTGAAATCATGTTTCCTGATCTT-3’

(下劃線部分為FAM熒光標簽序列)

Cf-5-Al lele-F2：

5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGCTGAAATCATGTTTCCTGATCTC-3’

(下劃線部分為HEX熒光標簽序列)