[發明專利]一種草酸脫羧酶及草酸脫羧酶的重組表達方法

在審

• 申請號: 201610217032.6
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN105695441A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 劉海峰;吳玉峰;宋保平
• 申請（專利權）人: 武漢康復得生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;A23L33/10;A61K38/51;A61P13/04;A61P13/00;C12N15/70
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 程殿軍;張瑾

1.一種草酸脫羧酶，其特征在于：為通過大腸桿菌表達系統進行重組表達， 并在pH＜3.0時穩定且有活力；表達過程中該草酸脫羧酶的蛋白序列較原生酶 蛋白序列缺失信號肽片段。

2.一種可食用組合物，其特征在于，含有權利要求1所述的草酸脫羧酶， 用于預防和/或治療原發性高草酸尿癥、II型高草酸尿癥、腸源性高草酸尿癥及 含草酸鈣泌尿結石疾病中的一種或多種。

3.根據權利要求2所述的可食用組合物，其特征在于，為藥物組合物、保 健食品或特殊醫學用途配方食品。

4.一種食品添加劑，其特征在于，含有權利要求1所述的草酸脫羧酶，用 于制備低草酸/無草酸的食品或飲料。

5.一種草酸脫羧酶的重組表達方法，適用于pH＜3.0時仍有活力的草酸脫 羧酶的表達生產，其特征在于，將優化后草酸脫羧酶編碼基因的DNA片段與 大腸桿菌表達載體按照3～9:1的摩爾比混合進行連接，構建重組表達載體，重 組表達載體轉化DH5a感受態細胞；通過PCR及測序驗證來篩選構建成功的重 組表達載體轉化菌，培養后抽取重組表達載體，轉化含有分子伴侶的大腸桿菌 表達菌株，進行15～30℃的低溫培養并誘導蛋白表達。

6.根據權利要求5所述的草酸脫羧酶的重組表達方法，其特征在于，所述 的優化包括刪除草酸脫羧酶編碼基因DNA片段的信號肽片段；或刪除草酸脫 羧酶編碼基因DNA片段的信號肽片段并在C端融合助溶標簽；或刪除草酸脫 羧酶編碼基因DNA片段的信號肽片段并在C端融合助溶標簽以及進行密碼子 優化；或對草酸脫羧酶編碼基因DNA片段進行密碼子優化和刪除信號肽片段。

7.根據權利要求6所述的草酸脫羧酶的重組表達方法，其特征在于，所述 助溶標簽為多聚谷氨酸片段，多聚天冬氨酸片段，多聚賴氨酸片段，多聚谷氨 酰胺片段和多聚天冬酰胺片段中的任意一種，或者由谷氨酸、天冬氨酸、天冬 酰胺、賴氨酸和谷氨酰胺五種氨基酸隨機組合的片段。

8.根據權利要求5所述的草酸脫羧酶的重組表達方法，其特征在于，所述 表達載體為乳糖誘導表達載體、半乳糖誘導表達載體、IPTG誘導表達載體、熱 誘導表達載體或者冷誘導表達載體。

9.根據權利要求5所述的草酸脫羧酶的重組表達方法，其特征在于，所述 大腸桿菌表達菌株為BL21、BL21(DE3)、K12、K12(DE3)、Origami、 Origami(DE3)、OrigamiB、OrigamiB(DE3)、Rosetta或Rosetta(DE3)。

10.根據權利要求5所述的草酸脫羧酶的重組表達方法，其特征在于，所 述的分子伴侶為pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pGTf2和pTf16中的任意一種或者 幾種。

11.根據權利要求1所述的草酸脫羧酶，其特征在于，氨基酸序列如SEQ IDNO:1～11任一所示。