[發明專利]一種高靈敏檢測黃曲霉毒素的方法及其應用

有效

• 申請號: 201610216721.5
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN105651899B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 焦揚;楊亞玲;趙嬌
• 申請（專利權）人: 云南健牛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N21/64
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 賽曉剛

1.一種高靈敏檢測黃曲霉毒素的方法及其應用，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）工作曲線的制作

配制黃曲霉毒素B1及黃曲霉毒素G1混合標準溶液0.5～200ng/mL，加入一定量的衍生試劑，在紫外燈下照射一定時間進行衍生反應，在選定色譜條件下進高效液相色譜進行測定，得到黃曲霉毒素回歸方程、相關系數、相對標準偏差、回收率；

（2）樣品提取

對于大米、玉米、小麥、花生、核桃、杏仁及其制品及中藥提取方法為：準確稱取粉碎均質后的樣品2～5g，精確至0.0001g，加入體積分數為70～80%的乙腈水溶液20～50 mL，劇烈振蕩 1 min，50±2℃水浴超聲提取20～30 min，以 3500～5000r/min 離心 5～10 min，取出上層溶液，重復提取2～3次，合并上清液，待用；

對于醬油、食醋、植物油脂提取方法為：準確稱取5.00～10.00g樣品，加入2～5 gNaCl和體積分數為70～80%的乙腈水溶液20～50 mL，渦旋混合1～3min，定量濾紙過濾，準確吸取 5.00 mL 濾液，加入10mL 超純水稀釋，混勻，待用；

（3）樣品測定

取步驟（2）中的提取液，按照步驟（1）進行熒光衍生，在與步驟（1）相同色譜條件進行HPLC分析，并對照步驟（1）所得的線性回歸方程，計算樣品中黃曲霉毒素的含量；

食品樣品中待測黃曲霉毒素包括：黃曲霉毒素 B1、G1；衍生試劑為三氟乙酸。

2.根據權利要求1所述的一種高靈敏檢測黃曲霉毒素的方法及其應用， 其特征在于步驟（1）所述衍生試劑體積百分比濃度為15～25%，所述的紫外燈下照射時間為5～20min。

3.根據權利要求1所述的一種高靈敏檢測黃曲霉毒素的方法及其應用， 其特征在于設定的液相色譜條件為：4.6 mm×250 mm，5.0 μm 的C18色譜柱，流動相甲醇-水45∶55，流速1.0 mL/min，進樣量50 μL，柱溫箱30℃。

4.根據權利要求1所述的一種高靈敏檢測黃曲霉毒素的方法及其應用， 其特征在于檢測器為熒光檢測器，激發波長 360 nm，發射波長 440 nm；配備熒光檢測器的高效液相色譜儀。