[發明專利]基于番茄黃化曲葉病毒病抗性基因Ty-3的CAPS分子標記

有效

• 申請號: 201610213541.1
• 申請日: 2016-04-07
• 公開（公告）號: CN105624327B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發明（設計）人: 王輝;王富;李文麗;董盼盼
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明涉及一種基于番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty?3的CAPS分子標記，該分子標記的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本發明還提供了一種擴增基于番茄黃化曲葉病毒病抗性基因Ty?3的CAPS標記的引物對，該引物對序列如下：正向引物序列：5’?TTGCCACATTAAGCAGAACG?3’；反向引物序列：5’?TGACGGTCATTGAATGTGCT?3’。該標記是一個基于PCR技術的共顯性標記，跟RFLP、AFLP等標記相比，可顯著降低成本，節省勞力。另外，該標記完全基于抗病基因Ty?3，與Ty?3基因共分離，用其檢測不存在假陽性問題。將該標記應用于苗期選擇，不僅可以減少工作量，而且能夠避免因接種不充分難以準確篩選出具有抗病基因的個體植株，從而加速育種進程。

技術領域

本發明屬于農業生物技術工程領域，特別涉及一種基于番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3的CAPS標記及擴增該分子標記的引物、利用分子標記的檢測方法及其應用。

背景技術

番茄(Solanum lycopersicum L.)屬于茄科(Solanaceae)，為一年生草本茄科植物。番茄起源于南美西部地區，是世界范圍內廣泛栽培的重要蔬菜作物之一，深受廣大消費者的喜愛。隨著番茄栽培面積的逐年擴大，栽培方式的多樣化，番茄病蟲害問題日趨嚴重，近年來，番茄黃化曲葉病毒病在世界各地保護地番茄種植上普遍發生，給番茄生產帶來巨大經濟損失。

近年來，番茄黃化曲葉病毒病抗病育種取得長足進步，截止目前，已發現Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-3a、Ty-4、Ty-5等多個抗性基因，其中Ty-1、Ty-2、Ty-3作為番茄抗TYLCV的主效抗性基因在生產中得以應用(Liedl,et al.,2013)。

近年來，分子標記尤其是以PCR為基礎的DNA分子標記技術在番茄育種中廣泛應用，大大加快了育種的進程和效率。目前，已有諸如REX-1(de Castro et al.,2007)、TG0302(Garcia et al.,2007)、P6-25(Ji ve ark.,2008)和UF_TY3-P23(Verlaan,et al.,2013)等多個與番茄黃化曲葉病毒病抗病基因緊密的連鎖標記被陸續開發出來，并逐步在育種實踐中加以應用。但這些標記均與抗病基因間存在一定的遺傳距離，故篩選時會出現一定比例的假陽性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3的CAPS標記，該標記與Ty-3基因完全連鎖。

本發明的另一目的在于提供該分子標記在番茄黃化曲葉病毒病抗性基因Ty-3檢測以及標記輔助育種中的應用。

為了實現本發明目的，本發明提供了一種基于番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3的CAPS標記，該分子標記的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本發明還提供了一種擴增基于番茄黃化曲葉病毒病抗性基因Ty-3的CAPS標記的引物對，該引物對序列如下：

正向引物序列：5’-TTGCCACATTAAGCAGAACG-3’；

反向引物序列：5’-TGATGGTCATTGAATGTGCT-3’。

本發明還提供了一種基于番茄黃化曲葉病毒病抗性基因Ty-3的CAPS標記的檢測方法，該方法以抗感番茄黃化卷葉病毒的番茄基因組DNA為模板經PCR擴增，擴增產物經BamHI酶切后得到能同時鑒定抗病親本、感病親本及其雜合體的基因型的特異譜帶，該特異譜帶為攜帶抗性基因的植株譜帶和不攜帶抗性基因的植株譜帶，所述攜帶抗性基因Ty-3的植株譜帶為核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的分子標記。

上述方法中，能同時鑒定抗病親本、感病親本及其雜合體的基因型的特異譜帶分別為332bp，211bp/121bp，332bp/211bp/121bp。