[發明專利]基于番茄黃化曲葉病毒病抗性基因Ty-3的CAPS分子標記

有效

• 申請號: 201610213541.1
• 申請日: 2016-04-07
• 公開（公告）號: CN105624327B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發明（設計）人: 王輝;王富;李文麗;董盼盼
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種基于番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3的CAPS分子標記，其特征在于，該分子標記的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.擴增權利要求1所述的分子標記的引物。

3.如權利要求2所述的引物，該引物序列如下：

正向引物序列：5’-TTGCCACATTAAGCAGAACG-3’

反向引物序列：5’-TGATGGTCATTGAATGTGCT-3’。

4.使用權利要求1所述分子標記的檢測方法，其特征在于，

該方法以抗、感番茄黃化曲葉病毒病的番茄基因組DNA為模板，用權利要求3所述的引物進行PCR擴增，擴增產物經BamHI酶切后得到能同時鑒定抗病親本、感病親本及其雜合體的基因型的特異譜帶，該特異譜帶為攜帶抗性基因的植株譜帶和不攜帶抗性基因的植株譜帶，所述攜帶抗性基因的植株譜帶為權利要求1所述的分子標記。

5.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述20μL的PCR反應體系如下：包括正、反向引物各0.8μM，1.2mM dNTPs，2μL含Mg²⁺的10×buffer，0.5units Taq聚合酶，DNA模板30-50ng，ddH₂O補至20μL。

6.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序均為：94℃預變5min；94℃變性30s，60℃退火45s，72℃延伸45s，35個循環；72℃延伸10min；保存溫度4℃。

7.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述不攜帶抗性基因Ty-3的植株PCR擴增產物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

8.權利要求1所述分子標記在番茄黃化曲葉病毒抗性基因Ty-3檢測或標記輔助育種中的應用。

9.權利要求3所述的引物在番茄黃化曲葉病毒抗性基因Ty-3檢測或標記輔助育種中的應用。

10.權利要求4-6任意一項所述鑒定方法在番茄黃化曲葉病毒抗性基因Ty-3檢測或標記輔助育種中的應用。