[發(fā)明專利]一種高效獲得重組蛋白的大腸埃希菌可溶性表達(dá)載體

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610210622.6
• 申請(qǐng)日: 2016-04-06
• 公開（公告）號(hào): CN107267539A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋永波;張景海
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N15/65;C12N15/66;C12N15/67
• 代理公司: 沈陽杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司21207
• 代理人: 靳玲

1.一種高效獲得重組蛋白的大腸埃希菌可溶性表達(dá)載體，通過異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)外源蛋白質(zhì)表達(dá)，其特征是：載體結(jié)構(gòu)中同時(shí)含有內(nèi)含肽基因與硫氧還蛋白基因，且所表達(dá)的內(nèi)含肽與硫氧還蛋白用六聚組氨酸標(biāo)記。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體，其特征是：所述載體包含如下結(jié)構(gòu)基因，按順序?yàn)榱劢M氨酸標(biāo)簽-柔性連接肽-幾丁質(zhì)結(jié)合域-內(nèi)含肽復(fù)合體編碼基因、外源目的基因、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、硫氧還蛋白-柔性連接肽-六聚組氨酸標(biāo)簽復(fù)合體編碼基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的表達(dá)載體的構(gòu)建方法，其特征在于，分別獲取內(nèi)含肽與硫氧還蛋白的核酸序列，通過設(shè)計(jì)合適的引物，對(duì)內(nèi)含肽和硫氧還蛋白的核酸序列進(jìn)行優(yōu)化和修飾，以通用型表達(dá)載體為母核，通過酶切、酶連，獲得特征結(jié)構(gòu)序列依次為六聚組氨酸標(biāo)簽-柔性連接肽-幾丁質(zhì)結(jié)合域-內(nèi)含肽復(fù)合體編碼基因、外源目的基因、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、硫氧還蛋白-六聚組氨酸標(biāo)簽復(fù)合體編碼基因的重組可溶性表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在內(nèi)含肽基因序列的5'端依次連接上幾丁質(zhì)結(jié)合域基因、柔性連接肽基因、六聚組氨酸標(biāo)簽基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在硫氧還蛋白基因3'端進(jìn)行六聚組氨酸基因標(biāo)記。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的外源目的基因的結(jié)構(gòu)中含有二硫鍵。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所用的限制性核酸內(nèi)切酶為BspI、BamHI，宿主菌為BL21。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征是：外源目的基因與硫氧還蛋白基因非融合表達(dá)。

9.權(quán)利要求1或2所述的表達(dá)載體在高效獲得重組蛋白中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的重組蛋白不含任何標(biāo)簽。