[發(fā)明專利]一種同步檢測百合隱癥病毒、斑駁病毒和黃瓜花葉病毒的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610210177.3 | 申請日： | 2016-04-07 |
| 公開（公告）號： | CN105695636A | 公開（公告）日： | 2016-06-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張玉寶;王亞軍;劉維;謝忠奎;王若愚;楊果;郭志鴻 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院寒區(qū)旱區(qū)環(huán)境與工程研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 730000 甘*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 同步 檢測 百合 病毒 斑駁 黃瓜花葉病毒 方法 | ||
1.一種同步檢測百合隱癥病毒、斑駁病毒和黃瓜花葉病毒的方法，其特征在于，包括以 下步驟：
①LSV、LMoV和CMV的多克隆抗體被包被在同一個PCR反應(yīng)管中，捕獲LSV、LMoV和CMV粒 子，具體是用pH9.6的碳酸鹽緩沖液將兔抗LMoV、LSV和CMV多克隆抗體稀釋后混合，使 LMoV、LSV和CMV三種抗體的終濃度分別為1μg/mL、10μg/mL和50μg/mL，取200μL上述稀釋的 混合抗體加入PCR管；
②捕獲的LSV、LMoV和CMV粒子作為模板，利用LSV、LMoV和CMV的特異性反向引物L(fēng)SV- R、LMoV-R和CMV-R以及M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行三重RT，合成LSV、LMoV和CMV三種病毒的cDNAs 第一鏈混合物；
③利用②獲得的cDNAs為模板，在TaqDNA聚合酶的作用下進(jìn)行三重PCR；
④采用瓊脂糖凝膠電泳檢測步驟③獲得的三重PCR反應(yīng)產(chǎn)物，LSV、LMoV和CMV三種病毒 核酸片段的電泳條帶分別出現(xiàn)在198bp、395bp和248bp處；
⑤根據(jù)電泳膠上擴(kuò)增條帶的有無及其大小判定所檢測的樣品是否感染LSV、LMoV或 CMV，若凝膠中僅存在198bp的核酸片段則說明樣品中含有LSV；若凝膠中僅存在395bp的核 酸片段則說明樣品中含有LMoV；若凝膠中僅存在248bp的核酸片段則說明樣品中含有CMV； 若凝膠中同時存在198bp和395bp的核酸片段，則說明樣品中同時含有LSV和LMoV；若凝膠中 同時存在198bp和248bp的核酸片段，則說明樣品中同時含有LSV和CMV；若凝膠中同時存在 198bp、395bp和248bp的核酸片段，則說明樣品中同時含有LSV、LMoV和CMV。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同步檢測百合隱癥病毒、斑駁病毒和黃瓜花葉病毒的方法， 其特征是所述進(jìn)行三重RT-PCR的引物為LSV、LMoV和CMV的特異性引物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的同步檢測百合隱癥病毒、斑駁病毒和黃瓜花葉病毒的方法，所 述LSV、LMoV和CMV分別為百合隱癥病毒、百合斑駁病毒和黃瓜花葉病毒。
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