[發明專利]用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條及其制備方法和鈣衛蛋白濃度的測定方法

在審

• 申請號: 201610206931.6
• 申請日: 2016-04-05
• 公開（公告）號: CN105785041A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 付國亮;段學軍
• 申請（專利權）人: 付國亮
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京國之大銘知識產權代理事務所(普通合伙) 11565
• 代理人: 李卉

1.一種用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條，其特征在于，所述的試紙條包括底板，所述的 底板上附著有沿縱向依次排列的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。

2.根據權利要求1所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條，其特征在于，所述的樣品吸 收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊在所述的底板上從左到右依次排列，所述的樣品吸收 墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊的長度比為13-17:10-12:20-24:24-24。

3.根據權利要求1所述的所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條，其特征在于，所述的 標記抗體墊包括包被有標記物的第一鈣衛蛋白單克隆抗體。

4.根據權利要求3所述的所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條，其特征在于，所述的 標記物標記的第一鈣衛蛋白單克隆抗體是熒光標記或膠體金標記的鈣衛蛋白抗體。

5.根據權利要求1所述的所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條，其特征在于，所述的 包被膜上包被有檢測帶和質控帶，所述檢測帶固定有第二鈣衛蛋白單克隆抗體，所述的質 控線上固定有兔抗鼠IgG抗體。

6.根據權利要求1所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述 的包被膜為硝酸纖維素膜。

7.一種權利要求1-6任意一項所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條的制備方法，其 特征在于，在試紙條的底板上依次固定樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。

8.根據權利要求7所述的用于定量檢測鈣衛蛋白的試紙條的制備方法，其特征在于，所 述的包被膜通過如下方法制備而得：

使用第一磷酸鹽緩沖液分別稀釋兔抗小鼠IgG和鈣衛蛋白抗體得到兔抗小鼠IgG溶液 和鈣衛蛋白抗體溶液，所述的第一磷酸鹽緩沖液濃度為0.01-0.03M，pH值為7.2-7.6，所述 的兔抗小鼠IgG溶液和鈣衛蛋白抗體溶液的濃度均為1mg/ml-1.5mg/ml；使用定量噴膜儀以 0.8-1.2μl/cm的量將二者以0.5cm-1.0cm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，35-38℃烘干0.5- 1.5h，加入干燥劑封存備用。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的標記抗體墊由如下方法制備而得：

制備鈣衛蛋白抗體溶液：用第一硼酸鹽緩沖液將鈣衛蛋白抗體透析得到鈣衛蛋白抗體 溶液，所述的第一硼酸鹽緩沖液濃度為0.03-0.07M，pH值為8.0-8.5，透析溫度為3-5℃，透 析時間T≥16h；將所述的鈣衛蛋白抗體溶液濃度調整為1.5-2mg/ml；

熒光微球預處理：使用pH4.5-5.0的MES活化緩沖液洗滌熒光微球，加入碳二亞胺和琥 珀酰亞胺使二者終濃度均為18-22mmol/L，室溫反應10-20min，充分洗滌熒光微球；

用濃度為0.03-0.07M的pH值為8.0-8.5的第二硼酸鹽緩沖液將預處理過的所述的熒光 微球復溶后加入所述鈣衛蛋白抗體溶液中，使所述的鈣衛蛋白抗體與熒光微球的質量比為 1-4∶50，室溫反應1.5-2.5h，加入第二磷酸鹽緩沖液室溫封閉20-40min，所述的第二磷酸鹽 緩沖液中BSA的質量分數為10％，所述的第二磷酸鹽緩沖溶液濃度為0.02M，pH值為7.2- 7.6；用第三磷酸鹽緩沖液保存液復溶至反應前體積，所述的第三磷酸鹽緩沖液中按質量百 分數計包括0.3-0.7％的BSA和0.2-0.3％的Tween-20，所述的第三磷酸鹽緩沖液pH值為 7.2-7.6，濃度為0.01-0.03M；使用定量噴膜儀以3-5μl/cm噴涂于玻璃纖維墊上，避光35-38 ℃烘干1h，加入干燥劑封存備用。

10.一種鈣衛蛋白濃度的測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

標準曲線的繪制：將鈣衛蛋白標準品配制成梯度濃度標準溶液進行熒光強度測定，以 檢測線、質控線的熒光強度比值為縱坐標，鈣衛蛋白標準溶液濃度為橫坐標，擬合成標準曲 線。

樣品的檢測：將待測樣品滴到試紙條上，然后用熒光檢測裝置檢測，得出所述的樣品中 的鈣衛蛋白的濃度；

所述的試紙條為權利要求1-6任一項所述的試紙條。