[發(fā)明專利]一種酶法制備甾體消炎藥潑尼松龍的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610202625.5
• 申請日: 2016-04-05
• 公開（公告）號: CN105734107A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜好勉;梁曉亮;魏喜換
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12P33/02
• 分類號: C12P33/02
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種酶法制備甾體消炎藥潑尼松龍的方法。

背景技術(shù)

潑尼松龍(化合物1，又名Prednisolone)是一種重要的腎上腺糖皮質(zhì)激素類藥品，主要用于過敏性與自身免疫性炎癥疾病，膠原性疾病。如風(fēng)濕病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、嚴(yán)重支氣管哮喘、腎病綜合癥、血小板減少性紫癜、粒細(xì)胞減少癥、急性淋巴性白血病、各種腎上腺皮質(zhì)功能不足癥、剝脫性皮炎、無皰瘡神經(jīng)性皮炎、類濕疹等。

潑尼松龍可以由醋酸潑尼松龍脫去醋酸根獲得，其他合成工藝有微生物轉(zhuǎn)化和化學(xué)合成兩類方法，常見的路線如下:

1.化學(xué)合成方法，例如專利CN103387595，文獻(xiàn)Steroids,72(1),26-30；2007和JournaloftheAmericanChemicalSociety,83,756-7；1961等報(bào)道，步驟繁瑣，采用重金屬催化劑和大量有機(jī)溶劑，經(jīng)過多次進(jìn)行分離，操作復(fù)雜，收率低，不利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

2.氫化可的松微生物脫氫，例如用熒光假單胞菌(ActaPharmaceuticaTurcica,45(1),41-49；2003)，食油假單胞菌(JournalofBiomedicine&Biotechnology,(4),219-226；2004)和球形芽孢桿菌(JournalofChemicalTechnology&Biotechnology,73(3),203-210；1998)等。微生物轉(zhuǎn)化法采用油水體系，轉(zhuǎn)化率較低，轉(zhuǎn)化周期長，轉(zhuǎn)化后提取純化困難，結(jié)果不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種酶法制備甾體消炎藥潑尼松龍的方法，該方法底物濃度高、酶用量少、收率高。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種酶法制備甾體消炎藥潑尼松龍的方法，以化合物2為底物，使其在氫受體、助溶劑、甾體1,2脫氫酶的存在下反應(yīng)生成目標(biāo)產(chǎn)物潑尼松龍，所述的反應(yīng)在pH為5～9、溫度為10～45℃的水相緩沖溶液中進(jìn)行，其中，所述的氫受體為甲萘醌或萘醌，所述的助溶劑為二甲基亞砜、吐溫-60、TritonX-100、聚乙二醇中的一種或多種的組合，且助溶劑的投料體積為反應(yīng)體系總體積的5～15％，所述的化合物2的結(jié)構(gòu)式如下：

優(yōu)選地，所述氫受體與底物的投料質(zhì)量比為10～1:1。

優(yōu)選地，所述的助溶劑為二甲基亞砜與吐溫-60二者的組合。

優(yōu)選地，所述的甾體1,2脫氫酶為購自蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司的牌號為EW1147的甾體1,2脫氫酶。

優(yōu)選地，所述的水相緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。

優(yōu)選地，反應(yīng)過程pH控制在7.0～8.0。

優(yōu)選地，具體實(shí)施過程如下：將所述的底物、氫受體、助溶劑、甾體1,2脫氫酶加入到反應(yīng)器中，在pH為5～9、溫度為10～45℃的水相緩沖溶液中進(jìn)行反應(yīng)，HPLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)完全后，再對產(chǎn)物依次進(jìn)行離心、洗滌沉淀、過濾、旋蒸處理。

由于上述技術(shù)方案的運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)：

1)解決了現(xiàn)有技術(shù)中采用化學(xué)合成法制備潑尼松龍過程中，步驟繁瑣，采用重金屬催化劑和大量有機(jī)溶劑所帶來的環(huán)境問題，同時(shí)還解決了制備過程中操作復(fù)雜、收率低的問題；

2)解決了現(xiàn)有技術(shù)中采用微生物轉(zhuǎn)化法制備潑尼松龍過程中，轉(zhuǎn)化率低、轉(zhuǎn)化周期長，轉(zhuǎn)化后提純困難，結(jié)果不穩(wěn)定的問題；

3)本發(fā)明所采用的酶法制備潑尼松龍過程中，其底物濃度高，酶用量少、收率高、純度好，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體使用的不同要求做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實(shí)施條件為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。

實(shí)施例1(酶的篩選)：

將化合物210mg，加入到1.55mLpH7.0磷酸鹽緩沖溶液中，而后加入200μl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的DMSO，100μl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的Tween-60，150μl60mg/ml的甲萘醌水溶液，并加入甾體1,2脫氫酶(購自蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司)10mg，于30℃震蕩2h，檢測轉(zhuǎn)化率，如表1。

表1