[發明專利]一種鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201610201397.X
• 申請日: 2016-04-01
• 公開（公告）號: CN105693854A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 魏思遠;趙光偉
• 申請（專利權）人: 重慶三杰眾鑫生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 鄭自群

1.一種鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟：

(1)抗原制備：鴨坦布蘇病毒用生理鹽水10000倍稀釋，經尿囊腔接種11 日齡易感鴨胚，收集接種48～120小時死亡鴨胚尿囊液，無菌檢驗合格，即為抗 原；

(2)鴨坦布蘇病毒轉移因子-白細胞介素2佐劑滅活疫苗的制備：抗原加終 濃度為0.1％甲醛，37℃滅活24小時，期間振搖；于4℃離心30分鐘；收集上 清液，將所述上清液濃縮15倍，然后將濃縮液轉入滅菌容器，于4℃保存；往 濃縮抗原中加入轉移因子和鴨白細胞介素2，使轉移因子(按多肽計算)終濃度 為2mg/ml，鴨白細胞介素2終濃度為4μg/ml，即為鴨坦布蘇病毒轉移因子-白細 胞介素2佐劑滅活疫苗；

(3)高免雞蛋的生產：選擇健康的產蛋雞，用步驟(2)中所述鴨坦布蘇 病毒轉移因子-白細胞介素2佐劑滅活疫苗對雞群進行產蛋前免疫，當鴨坦布蘇 病毒卵黃中和抗體效價應≥1:640為合格，然后收集高免雞蛋；

(4)消毒：將所述高免雞蛋浸入40℃、0.1％新潔爾滅水溶液中消毒15～ 20分鐘，然后再將所述高免雞蛋用福爾馬林密閉熏蒸消毒30分鐘；

(5)分離卵黃：除去蛋清、胚盤和系帶、收集卵黃；

(6)抗體萃?。簲嚢枋孤腰S呈均勻膏狀，裝入攪拌罐中，按體積比1:1加 入25℃的滅菌注射用水，調節pH至4.3；于轉速為200轉/分鐘，攪拌30分鐘；

將卵黃液轉入不銹鋼桶中，加入終濃度為4％正辛酸，攪拌30分鐘，室溫放 置12～24小時；用40目濾網撇去漂浮在上層的蛋黃，用80目濾布過濾，收集 濾液，濾出液和下層液體合并，用板框過濾器加濾板和0.4微米濾膜過濾，即 為抗體半成品；

將抗體半成品轉入用0.2％甲醛溶液消毒的冰柜中，4℃冷藏5小時，使殘留 的辛酸結晶凝結析出，用80目濾網撇去浮在上層的辛酸結晶，液調pH至7.0， 再后用磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液調節pH至6.9，即為抗體半成品；

(7)過濾：抗體半成品用過濾精度0.2μm的筒式濾芯過濾除菌，無菌操 作分裝，即得到鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體。

2.根據權利要求1所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在 于，所述步驟(7)中鴨坦布蘇病毒卵黃中和抗體效價≥1:512。

3.根據權利要求1所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在 于，所述步驟(1)中，鴨胚接種為0.1ml/胚。

4.根據權利要求1所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在 于，所述步驟(2)中振搖次數為4次，每次3分鐘。

5.根據權利要求1所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在 于，所述步驟(2)中離心轉速為4000轉/分鐘。

6.根據權利要求1所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在 于，所述步驟(2)中濃縮是用截留分子量為6000道爾頓的中空纖維超濾器。

7.根據權利要求1所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在 于，所述步驟(3)的免疫程序如下：接種100～110日齡商品蛋雞，依次進行：

基礎免疫：每只雞腿部肌肉注射0.5ml；

加強免疫：在基礎免疫后21日進行第2次接種，每只雞胸部肌肉注射1.5ml；

強化免疫：在加強免疫后15日進行第3次接種，每只雞頸背部皮下注射 2.0ml；

維持免疫：當卵黃中鴨坦布蘇病毒卵黃中和抗體效價臨界1:640時，維持 接種1次，每只雞頸背部皮下注射疫苗2.0ml。

8.權利要求1至7中任一項所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體在治療鴨坦布 蘇病毒病方面的應用。

9.根據權利要求8所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體在治療鴨坦布蘇病毒病 方面的應用，其特征在于，包括：皮下或肌肉注射，8日齡以內雛鴨按0.5～0.8ml/ 只；9～15日齡雛鴨按1.0ml/只；16日齡以上按1.0ml/kg體重。

10.根據權利要求8或9所述鴨坦布蘇病毒精制卵黃抗體在治療鴨坦布蘇 病毒病方面的應用，其特征在于，還包括配合抗生素來控制細菌繼發感染。