[發(fā)明專利]一種鑒定煙草品種純度的分子生物學方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610197063.X | 申請日： | 2016-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN105734141A | 公開（公告）日： | 2016-07-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 蔡長春 | 申請（專利權(quán)）人： | 湖北省煙草科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 江蘇愛信律師事務所 32241 | 代理人： | 唐小紅 |
| 地址： | 430030 湖北省武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 鑒定 煙草 品種 純度 分子生物學 方法 | ||
1.一種鑒定煙草品種純度的分子生物學方法，其特征在于具體步驟依次如下：
A、將對照與待檢煙草品種種子分別播種于已標識的營養(yǎng)缽中，置于光照培養(yǎng)架上培養(yǎng)，24小時內(nèi)輔助燈光設(shè)計為開燈8~10小時，關(guān)燈14~16小時，室內(nèi)溫度保持在25~28℃，根據(jù)營養(yǎng)缽中營養(yǎng)土干濕情況補充水分；
B、待煙苗長出7~10片真葉后，隨機選取數(shù)量相等的對照與待檢煙草品種煙苗，每株煙苗采集1~3片真葉，采用CTAB小樣法提取和純化基因組總DNA，將每份DNA濃度調(diào)至相同，為100~200ng/μl，對照煙草品種各煙苗DNA等量混合構(gòu)建成為對照DNA混合池，待檢煙草品種各煙苗DNA等量混合構(gòu)建成為待檢DNA混合池，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>
C、利用基因組測序技術(shù)對步驟B中的對照和待檢煙草品種DNA混合池分別進行40~50倍深度的重測序，獲得重測序數(shù)據(jù)，根據(jù)煙草基因組參考序列采用生物信息學方法進行基因組序列拼接與組裝，獲得對照和待檢煙草品種全基因組序列；
D、利用生物信息學方法比較對照與待檢煙草品種全基因組序列的堿基差異，計算出待檢煙草品種純度，以此作為判斷待檢煙草品種純度高低的依據(jù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定煙草品種純度的分子生物學方法，其特征在于：在步驟B中，選取對照與待檢煙草品種煙苗數(shù)量要相等，為10-15株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定煙草品種純度的分子生物學方法，其特征在于：在步驟B中，將提取和純化后的每株煙苗的DNA濃度調(diào)至相同，為100~200ng/μl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定煙草品種純度的分子生物學方法，其特征在于：在步驟B中，對照與待檢煙草品種各煙苗DNA分別等量混合構(gòu)建成為對照DNA混合池與待檢DNA混合池。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定煙草品種純度的分子生物學方法，其特征在于：在步驟C中，對照和待檢煙草品種基因組的重測序深度為40~50倍。
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