[發明專利]雙檢測線SAA免疫熒光層析定量檢測試劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201610196332.0
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105785038A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 湯永平;李之華;張曉麗;潘秀華;解巧麗
• 申請（專利權）人: 廣州市微米生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王海曼

技術領域

本發明提供一種免疫熒光層析定量檢測試劑，具體地說，是一種雙檢測線SAA免疫熒 光層析定量檢測試劑及其制備方法；屬于體外診斷試劑技術領域。

背景技術

血清淀粉樣蛋白A(SerumamyloidAprotein，SAA)，是一種敏感的急性期炎癥標志物， 正常人血清SAA值為0-0.78mg/l，當機體受到感染、炎癥、損傷、腫瘤等刺激后，肝臟細 胞大量分泌SAA，血清中SAA水平隨著機體炎性反應的發展可在5-6小時內迅速升高約 1000倍，8-12h內SAA即可達到峰值，增高幅度可達正常值的2000倍，在臨床診斷中當 SAA含量>10mg/l時，才作為急性炎癥的標志。當機體的炎性反應被控制以后，SAA迅速 降低至正常水平，正是這種特征使SAA可作為反應機體感染或創傷的等炎癥狀態的敏感指 標，同時作為炎癥恢復的評價指標。臨床意義與CRP相類似，檢測血液中SAA的濃度水 平，有助于診斷非特異炎癥、評估炎癥活動程度、監控炎癥活動及治療后效果。

除了急性期由肝臟大量分泌SAA外，在正常的脂肪細胞、腫瘤細胞以及動脈粥樣硬化 斑塊中的多種細胞也能合成。因此，在過度肥胖處于亞健康狀態的人群及患有動脈粥樣硬 化的人群中，血清SAA的含量也高于正常人，而處于慢性炎癥的狀態。SAA不僅僅是炎癥 標志物，也是炎癥信號觸發劑，可誘導IL-6、IL-8和MCP-1等多種促炎性細胞因子的分泌， 促發全身系統性慢性低度炎癥的發生，同時SAA能夠刺激巨噬細胞、內皮細胞等相關靶細 胞，上調各種炎癥因子的表達，進一步加重機體的炎癥水平。SAA進入血漿后，能迅速與 HDL結合，形成SAA-HDL復合物，SAA結合到HDL上后能使其更容易與血管上的蛋白 聚糖黏附，從而引起和加重血管動脈粥樣硬化的形成。

此外，類風濕性關節炎、結核病、麻風病患者體內SAA濃度的變化是一個慢性升高的 過程，是合成AA-淀粉纖維的先決條件，繼而會引發淀粉樣變性。因此，能對慢性變化的 SAA進行檢測，有利于臨床對患者治療方案的調整。

臨床目前針對的是急性期SAA進行檢測，而對非急性期，SAA含量低于急性期，卻又 明顯高于正常人血清的含量，長期處于慢性炎癥的患者缺乏快速檢測的方法。因此，發明 一種能同時適用于急性期和慢性炎癥期SAA含量檢測的試紙在個人在診斷、體檢等方面的 運用具有重要的意義。

目前，SAA的檢測方法主要有以下幾種：

酶聯免疫吸附法(ELISA)，采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶 與底物產生顏色反應，用于定量測定。采用這種方法進行測定具有較高的靈敏度，但是操 作過程繁瑣，每次測值均需要繪制標準曲線，準確度誤差大，測定時間較長，儀器昂貴且 需要經過一定專業培訓的人員進行操作，因此不符合臨床快速檢測的要求。

膠體金免疫層析法，該方法操作簡單，但靈敏度低，當樣本中的含量低時會出現漏檢 的情況，通常用于定性或者半定量的測定，不符合臨床上進行含量測定的需求，因此受到 一定的限制。

免疫比濁法，利用抗原抗體反應形成一定結構的免疫復合物，根據復合物在溶液中具 有的特殊光學性質進行檢測，但在檢測時抗原或抗體過量會造成誤差較大，并且容易受到 血脂的影響。

熒光免疫層析法，利用熒光物質在特定的激發光照射下發射熒光的特點，具有特異性 強、重復性好的特點，針對急性炎癥時SAA含量進行檢測，目前已在醫學上進行推廣，并 且發展迅猛。

中國專利201510583004.1公開了一種CRP/SAA定量聯合檢測免疫熒光層析試紙及其 制備方法，中國專利201510014077.9公開了PCT/SAA聯合快速檢測用試紙條及其制備方 法，但是，針對SAA快速的檢測免疫層析法中，膠體金疫層析和熒光免疫層析在進行質控 線C的設置時，一般在包被膜4上包被一條抗IgG的單克隆抗體或者是抗IgG的多克隆抗 體，用來捕獲膠體金或者是熒光微球標記的單克隆抗體，因此在測值的過程中受層析效果 的影響造成C值的波動較大，起到的作用也僅僅是試紙條檢測結果是否有效，在定量檢測 的實驗中，測值的重復性差。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的是提供一種能同時提高靈敏度高和檢測范圍，滿足了臨 床上對急性炎癥、慢性炎癥患者體內SAA水平的檢測的雙檢測線SAA免疫熒光層析定量 檢測試劑，本發明還公開上述檢測試劑的制備方法。