[發明專利]一種菌落總數測試片、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201610195209.7
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105754849B
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 陳萍;王艷蕊;王佳男;李玉擴;陳紅;王秀娟;任大勇;畢云楓
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司22201
• 代理人: 劉世純,王恩遠

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種菌落總數測試片、制備方法及其在檢測食品中菌落總數方面的應用。

背景技術

菌落總數是反映食品衛生質量的重要指標，用來判定食品被細菌污染的程度。菌落總數測定是我國熟肉制品、水產制品、糧食制品、即食果蔬制品、即食調味品、飲料等多類農產品和食品檢測標準中的檢測指標，也是食品風險預測和危害評估的重要監測項目。目前GB 4789.2《食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定》采用平板計數法，該方法需要進行培養基配制、滅菌、玻璃器皿清洗等工作，程序繁瑣，工作量大。微生物測試片類檢測產品省去了配制培養基、消毒滅菌和培養器皿的清洗處理等大量輔助性工作，計數便捷，使用起來只需要3個簡單的步驟：樣品制備、增殖培養和計數，是國內外進行微生物污染計數測定最好的檢測產品。

現有商業化微生物測試片檢測產品中，美國3M公司以冷水可溶凝膠為載體的Petrifilm^TM測試片一直走在世界前列，在世界各地使用的比較多,國產測試片產品主要是由廣州綠洲生化和北京陸橋科技有限公司等研發的以無紡布為載體的測試片產品，此外還有一些測試片處于研發和小范圍使用階段。雖然這些測試片具有方便實用的突出優勢，但測試片作為微生物檢測的新技術仍存在一些不足，在細菌生長、菌落呈色擴散和準確計數等方面的技術瓶頸尚需有效解決。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種操作簡單、價格低廉、檢測準確的菌落總數冷水凝膠測試片，該測試片依次由內側有粘性的透明塑料上層膜(如透明度高、無毒無刺激性氣味、防水透氣的PET硅膠膜，厚度為0.05mm～0.10mm)、帶有鏤空區域的塑料中層板(如硬度較好的聚丙烯塑料板或PET塑料板，厚度為 0.15mm～0.30mm)、印刷有方格的底板(如防水、防滲透的白色銅版紙，厚度為0.10mm～0.20mm)組成；以上材料耐高溫的溫度為130℃～150℃；塑料中層板的鏤空區域為圓形、橢圓形或方形結構，鏤空區域面積與中層板面積的比例范圍為1：1.6～2.7，在鏤空區域內填充有菌落總數顯色檢測培養基，透明塑料上層膜的內側涂覆有復配冷水可溶性凝膠。

菌落總數顯色檢測 培養基除基礎培養基胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化鈉、葡萄糖外，另加入了顯色劑TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)、促生長因子丙酮酸鈉、表面活性劑吐溫80、甘露醇和疏松劑豆渣；其中疏松劑豆渣自己制備：將鮮豆渣置于50～60℃恒溫干燥箱烘干后，磨碎，過100～120目篩。

復配冷水可溶性凝膠由瓜爾膠、聚丙烯酸鈉和羧甲基維素鈉組成。

菌落總數顯色檢測 培養基重量組份為：胰蛋白胨15～30g、酵母浸粉5～15g、氯化鈉5～10g、葡萄糖1～5g、丙酮酸鈉1～3g、甘露醇1～3g、吐溫80 1～3mL、 TTC 0.2～0.5g、豆渣3～10g。

復配冷水可溶性凝膠重量組分為：瓜爾膠8g、聚丙烯酸鈉1～2g和羧甲基纖維素鈉1～2g。

本發明又一個目的是提供上述菌落總數測試片的制備方法，其步驟如下：

(1)培養基干粉制備

將胰蛋白胨15～30g、酵母浸粉5～15g、氯化鈉5～10g、葡萄糖1～5g、豆渣3～10g加入到90mL蒸餾水中，加熱、攪拌溶解后，再加入丙酮酸鈉1～3g、甘露醇1～3g、吐溫80 1～3mL攪拌溶解，調節pH至6.8～7.2，121℃高壓滅菌 15～20min，冷卻至45～55℃；將TTC 0.2～0.5g用10mL蒸餾水溶解后，0.22μm 條件過濾除菌后加入到前述的培養基中，攪拌混勻。

上述培養基溶液放入45～50℃無菌干燥箱中烘干，研磨成粉末，過100～120 目分子篩，備用。

(2)復配冷水凝膠制備

將冷水凝膠瓜爾膠、聚丙烯酸鈉和羧甲基纖維素鈉分別研磨成粉末，過 100～120目分子篩，按8：1～2：1～2重量比例充分混勻。

(3)菌落總數測試片的制備

將上層、中層及底層板材料剪裁成同樣大小，采用聚丙烯酸樹脂壓敏膠(透明、無毒、無味、無菌)將一側封閉粘合；

將上述復配冷水可溶凝膠粉末，均勻地涂在透明塑料上層膜的內側有粘性的一面，厚度為0.10mm～0.20mm，然后將上述測試片在121℃條件下高壓滅菌 15～20min后，取出冷卻至室溫。

先在中層板鏤空區域對應的底板上均勻涂覆聚丙烯酸樹脂壓敏膠，厚度為 0.05mm～0.10mm，再將菌落總數顯色檢測 培養基粉末填充在中層板的鏤空區域內，厚度為0.10mm～0.20mm；