[發明專利]回輸臨床治療用人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞體外三維分離培養保存方法

在審

• 申請號: 201610194777.5
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105713869A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 王凌儀;曹小麗;陳玲;陳拓;陳強;李小珍;張穎;沈境;李磊;周燕婷
• 申請（專利權）人: 王凌儀
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/0775;A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種臨床治療級細胞治療用人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞制備方法，由以下步驟組成；(1)人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞培養液組合；(2)篩選用葉狀絨毛膜高擬體內細胞外基質制備；(3)應用葉狀絨毛膜高擬體內細胞外基質與人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞培養液組合篩選培養人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞，以及人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞長期凍融保存液制備。

2.一種利用權利要求1所述的人胎盤葉狀絨毛膜來源的間充質干細胞培養液組合包括：

配制培養液A：胎盤多肽注射液0.05ml/L、EGF5～25ng/ml、干細胞生長因子(SCF)2～11ng/ml、轉鐵蛋白5～15μg/ml、維生素B40.5～1mg/L、維生素C1～4μg/ml、胰島素5～8μg/ml、青霉素50～100u/ml、鏈霉素100u/mL、氫化可的松0.4μg/ml、商用培養基-低糖DMEM/F12(3:1)定容到500ml。PH控制在7.2～7.4；

配制培養液B：胎盤多肽注射液0.1ml/L、人血清白蛋白(HSA)1～3g/L、人血纖粘蛋白(FN)1～5μg/L、人層粘連蛋白(LN)5～10μg/L、血小板衍生因子(PDGF)1～10mg/L、胎盤生長因子(rhPIGF)1～6mg/L、血管內皮細胞生長因子(VEGF)1～6μg/L、EGF5～10ng/ml、維生素B1～5mg/L、葉酸1～10ng/ml、維生素E0.05～1mg/L、維生素B40.5～1mg/L、黃體酮0.01～0.04μg/L、輔酶Q100.1～2mM/L、膽固醇1～10mg/L、牛磺酸0.1～0.4g/L、肝素鈉0.1～0.3g/L、腺苷10～15ng/ml、胰島素5～6μg/ml、青霉素100u/ml、鏈霉素100u/mL、商用培養基低糖DMEM與商用培養基F12(1：1)定容到500ml。PH控制在7.2～7.4；

配制培養液C:人胎盤組織液0.01～0.3ml/L、人血清白蛋白(HSA)0.1～6g/L、人血纖粘蛋白(FN)3～25μg/L、人層粘連蛋白(LN)10～60μg/L、重組人胰島素樣生長因子-1(IGF-1)1～4mg/L、血小板衍生因子(PDGF)10～20mg/L、胎盤生長因子(rhPIGF)6～10mg/L、血管內皮細胞生長因子(VEGF)6～10μg/L、重組人肝細胞生長因子(HGF)5～20mg/L、EGF、bFGF10～25mg/L、重組人腦源性神經營養因子(BDNF)15～40ng/ml、維生素B1～4mg/L、葉酸1～15ng/ml、黃體酮0.01～0.06μg/L、維生素E0.05～1.2mg/L、維生素C0.1～10mg/L、維生素B40.1～0.5mg/L、輔酶Q100.1～2mM/L、膽固醇1～10mg/L、牛磺酸0.1～0.4g/L、肝素鈉0.1～0.3g/L、還原性谷胱甘肽3～6μg/L、油酸0.5～7.5mg/L、轉鐵蛋白6～20mg/L、腺苷10～25ng/ml、胰島素5～7mg/L、多聚賴氨酸4～6mg/L、青霉素100u/ml、鏈霉素100u/mL、商用培養基低糖DMEM與商用培養基F12(1：1)定容到500ml。PH控制在7.2～7.4。

3.一種利用權利要求1所述篩用葉狀絨毛膜高擬體內細胞外基質制備方法，包括其中所述的葉狀絨毛膜高擬體內細胞外基質；制備包括以下步驟：A)葉狀絨毛膜組織消毒處理；B)葉狀絨毛膜高擬體內細胞外基質脫細胞處理；C)將消毒或經脫細胞處理的葉狀絨毛膜高擬體內細胞外基質進一步進行低溫、脫水、輻照滅菌處理；其中所述步驟B)的脫細胞方法選自冷酶交聯劑法、酶－非離子表面活性劑－絡合劑聯合法、絡合劑加鹽-陰離子表面活性劑法或胰酶聯合EDTA交聯液法。