[發明專利]一種肉類中沙門氏菌含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201610194726.2
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105784798A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 張長璐;王君
• 申請（專利權）人: 山東五洲檢測有限公司
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 濟寧眾城專利事務所 37106
• 代理人: 李效寧

技術領域

本發明涉及食品檢測領域，具體是一種肉類中沙門氏菌含量的檢測方法。

背景技術

沙門氏菌病是公共衛生學上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原就是沙門氏菌， 沙門氏菌屬腸道細菌科，能夠引起食物中毒，導致胃腸炎、傷寒和副傷寒。它們除可感染 人外，還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。人畜感染后可呈 無癥狀帶菌狀態，也可表現為有臨床癥狀的致死疾，它可能加重病態或死亡率，或者降低 動物的繁殖生產力。

隨著人們生活水平的提高，肉食品逐漸變為人們的日常食品，然后，人們感染沙門氏 菌的重要來源就是肉食品。為了人們健康，檢測肉類中沙門氏菌的含量勢在必行。目前， 沙門氏菌的檢測方法主要包括培養法和免疫學檢測法。培養法和免疫學檢測法是根據沙門 氏菌的生長特性，采用選擇性的培養基使沙門氏菌成為優勢菌群，然后基于沙門氏菌的生 化特性和菌體表面抗原特性，利用生化反應和抗原-抗體反應的特異性進行沙門氏菌的 檢測。這些方法大都存在操作復雜、易受干擾、難以定量檢測的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種肉類中沙門氏菌含量的檢測方法，以解決上述背景技術中 提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種肉類中沙門氏菌含量的檢測方法，步驟如下：

1)樣品制備，稱取適量肉類樣品，使用12-15倍的生理鹽水均質拍打15-20min，并 在4000-5000rmp下離心分離10-15min，過濾，取上層清液，將殘渣再次加入8-10倍的生 理鹽水均質拍打15-20min，并在4000-5000rmp下離心分離10-15min，過濾，取上層清液， 合并兩次的上層清液，獲得上層總液，備用；

2)空白樣品制備，稱取適量不含沙門氏菌的空白肉類樣品，按照步驟1)，獲取空白 上層總液，備用；

3)獲取八份不同已知濃度的沙門氏菌溶液，取第一個濃度沙門氏菌菌液用無菌生理 鹽水稀釋10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸倍，各取200μL沙門氏菌的稀釋液分別注入到12 個培養皿中(每個稀釋倍數做平行樣)，將各個培養皿中的稀釋液分別涂布于LB平板上， 于35～37℃培養箱中培養24h,計數每個平板上的可疑菌落數,挑取可疑菌落進行生化和血 清學鑒定驗證后，得到1個已知濃度的沙門氏菌溶液。以同樣的步驟對第二個濃度進行培 養分析，以此類推得到多份不同已知濃度的沙門氏菌溶液；

4)已知濃度樣品的制備，稱適量步驟2)制備的空白上層總液，均分為八份，并分別 加入同等體積的步驟3)制備的已知濃度的沙門氏菌溶液，獲得八份已知濃度樣品；

5)確定沙門氏菌與摻硼金剛石膜電極響應電流的依從關系，采用CHI660D電化學工 作站用電化學計時電流的方法快速檢測沙門氏菌的濃度，以摻硼金剛石膜電極為工作電極， 鉑絲電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，設置工作電極的檢測電位為0.9～1.15V， 電解池中為pH7.2～7.6的磷酸-磷酸鹽緩沖溶液；將上述步驟4)獲得的八份已知濃度樣品 逐一進樣，記錄每次進樣時摻硼金剛石膜電極的響應電泳的電流值，根據全部進樣的沙門 氏菌液濃度和與其對應響應電流的電流值作曲線，得到響應電流-沙門氏菌濃度曲線，該 曲線為一直線，確定沙門氏菌與摻硼金剛石膜電極響應電流的依從關系為線性關系；

6)待測樣品的檢測，稱取待測肉類樣品，按照步驟1)，獲取待測上層總液，將待測 上層總液進樣，記錄摻硼金剛石膜電極的響應電泳的電流值，結合步驟5)獲得的響應電 流-沙門氏菌濃度曲線，得出待測肉類樣品中的沙門氏菌濃度。

作為本發明進一步的方案：所述肉類包括紅肉和白肉。

作為本發明再進一步的方案：所述的響應電流-沙門氏菌濃度曲線用于擬合表達摻硼 金剛石膜電極的響應電流與沙門氏菌濃度依從關系的公式，擬合得到的公式為ΔI＝Kx， 其中ΔI為計時電流變化，單位為μA，K為常數，x為沙門氏菌濃度，單位為cfu/mL。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明能夠檢測出肉類中沙門氏菌的含量， 大大降低了人們感染沙門氏菌的幾率，有利于人們的身體健康。本發明檢測方法具有操作 簡單、不易受干擾、檢測時間短、檢測準確度高等優點。