[發明專利]一種肉類中沙門氏菌含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201610194726.2
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105784798A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 張長璐;王君
• 申請（專利權）人: 山東五洲檢測有限公司
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 濟寧眾城專利事務所 37106
• 代理人: 李效寧

1.一種肉類中沙門氏菌含量的檢測方法，其特征在于，步驟如下：

1)樣品制備，稱取適量肉類樣品，使用12-15倍的生理鹽水均質拍打 15-20min，并在4000-5000rmp下離心分離10-15min，過濾，取上層清液，將殘 渣再次加入8-10倍的生理鹽水均質拍打15-20min，并在4000-5000rmp下離心 分離10-15min，過濾，取上層清液，合并兩次的上層清液，獲得上層總液，備 用；

2)空白樣品制備，稱取適量不含沙門氏菌的空白肉類樣品，按照步驟1)， 獲取空白上層總液，備用；

3)獲取八份不同已知濃度的沙門氏菌溶液，取第一個濃度沙門氏菌菌液用 無菌生理鹽水稀釋10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸倍，各取200μL沙門氏菌的稀 釋液分別注入到12個培養皿中(每個稀釋倍數做平行樣)，將各個培養皿中的 稀釋液分別涂布于LB平板上，于35～37℃培養箱中培養24h,計數每個平板上的 可疑菌落數,挑取可疑菌落進行生化和血清學鑒定驗證后，得到1個已知濃度的 沙門氏菌溶液。以同樣的步驟對第二個濃度進行培養分析，以此類推得到多份不 同已知濃度的沙門氏菌溶液；

4)已知濃度樣品的制備，稱適量步驟2)制備的空白上層總液，均分為八 份，并分別加入同等體積的步驟3)制備的已知濃度的沙門氏菌溶液，獲得八份 已知濃度樣品；

5)確定沙門氏菌與摻硼金剛石膜電極響應電流的依從關系，采用CHI660D 電化學工作站用電化學計時電流的方法快速檢測沙門氏菌的濃度，以摻硼金剛石 膜電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，設置工作電 極的檢測電位為0.9～1.15V，電解池中為pH7.2～7.6的磷酸-磷酸鹽緩沖溶液； 將上述步驟4)獲得的八份已知濃度樣品逐一進樣，記錄每次進樣時摻硼金剛石 膜電極的響應電泳的電流值，根據全部進樣的沙門氏菌液濃度和與其對應響應電 流的電流值作曲線，得到響應電流-沙門氏菌濃度曲線，該曲線為一直線，確定 沙門氏菌與摻硼金剛石膜電極響應電流的依從關系為線性關系；

6)待測樣品的檢測，稱取待測肉類樣品，按照步驟1)，獲取待測上層總 液，將待測上層總液進樣，記錄摻硼金剛石膜電極的響應電泳的電流值，結合步 驟5)獲得的響應電流-沙門氏菌濃度曲線，得出待測肉類樣品中的沙門氏菌濃 度。

2.根據權利要求1所述的肉類中沙門氏菌含量的檢測方法，其特征在于， 所述肉類包括紅肉和白肉。

3.根據權利要求1所述的肉類中沙門氏菌含量的檢測方法，其特征在于， 所述的響應電流-沙門氏菌濃度曲線用于擬合表達摻硼金剛石膜電極的響應電流 與沙門氏菌濃度依從關系的公式，擬合得到的公式為ΔI＝Kx，其中ΔI為計時 電流變化，單位為μA，K為常數，x為沙門氏菌濃度，單位為cfu/mL。