[發明專利]一種禽網狀內皮增生癥病毒亞單位疫苗注射復合物及其制備方法有效
| 申請號： | 201610191956.3 | 申請日： | 2016-03-30 |
| 公開（公告）號： | CN105664151B | 公開（公告）日： | 2021-06-29 |
| 發明（設計）人： | 郭慧君;袁霏;李宏梅 | 申請（專利權）人： | 山東農業大學 |
| 主分類號： | A61K39/21 | 分類號： | A61K39/21;A61K39/39;A61P31/14 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 271018 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種禽 網狀 內皮 增生 病毒 單位 疫苗 注射 復合物 及其 制備 方法 | ||
1.一種禽網狀內皮增生癥病毒亞單位疫苗注射復合物，其特征在于，包括禽網狀內皮增生病毒亞單位疫苗抗原和核酸緩釋佐劑，
其中所述的禽網狀內皮增生病毒亞單位疫苗抗原為gp90蛋白抗原，其制備方法是通過設計的特異性引物：
上游引物：5-CCGGAATTCTCCTCCATACCTACCTATTACA-3 '其核苷酸序列如Seq ID No:1所示；
下游引物：5-AGAGTCGACTCAATTAGGGAGTGCCGTGT-3其核苷酸序列如Seq ID No:2所示；
擴增REV囊膜蛋白gp90的基因，構建包含gp90基因的原核表達質粒重組質粒REV-gp90-pET32a，經誘導表達純化后獲得；具體步驟如下：
純化后的gp90蛋白抗原用PBS稀釋至1.0mg/mL，之后按蛋白抗原：免疫佐劑按體積比1：1混合，于振蕩器上震蕩1小時后，使用超聲破碎儀進行乳化，超聲乳化的條件為：功率為350W，工作時間3s，間歇時間2s，溫度控制在25℃，至乳化完全后停止超聲；
所述的核酸緩釋佐劑其包括如下組分：全硫代修飾的5‘-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’核酸分子，其核苷酸序列如Seq ID No:3所示； 7號白油；硬脂酸鋁和司本80，其制備方法如下：
7號白油和司本80分別按94%和6%體積比混合，之后將硬脂酸鋁按2%質量比加入到上述混合物中，116℃高壓滅菌，冷卻至50℃，用力振搖至透明狀；
之后再按100μg/mL添加的上述全部硫代化修飾的CpG-ODN，混勻，制備成油乳狀。
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