[發明專利]一種單寧酸為模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制備方法

有效

• 申請號: 201610191243.7
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105734036B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 劉燕;劉方方;倪良;孟敏佳;鐘國星
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08;C12N11/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種單寧酸為模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、一定質量的單寧酸加入到無水乙醇中，然后加入一定體積質量分數為25~28%的氨水，強烈攪拌，加入一定體積的正硅酸四乙酯，攪拌2h，然后一定體積的氨丙基三乙氧基硅烷加入到混合溶液中，室溫攪拌24h，反應后依次用無水乙醇和水洗滌5次以洗脫未反應的單寧酸、氨水和氨丙基三乙氧基硅烷，將產物在25℃下干燥，得到外表面氨丙基三乙氧基硅烷修飾的以單寧酸為模板的介孔硅，簡稱為APTES@MSN；

步驟2、用磷酸鹽緩沖液溶解胰蛋白酶，制成胰蛋白酶溶液，然后加入步驟1得到的APTES@MSN，放入振蕩器中，37℃振蕩3~5h，振蕩速率為150~200rpm；然后將固體取出浸沒于醋酸鈉緩沖液2~3h以洗去外表面固定化的胰蛋白酶，最后以磷酸鹽緩沖液抽洗至濾液中檢測不到胰蛋白酶即得到單寧酸為模板的介孔硅固定化胰蛋白酶；

步驟2中，所述的醋酸鈉緩沖液濃度為20mmol/L，pH為3.0~3.5。

2.根據權利要求1所述的一種單寧酸為模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制備方法，其特征在于，步驟1中，單寧酸，無水乙醇，氨水，正硅酸四乙酯(TEOS)和氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)的用量比為68~272mg：50mL：25mL：0.3mL：0.1~0.3mL。

3.根據權利要求1所述的一種單寧酸為模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制備方法，其特征在于，步驟2中，所述的胰蛋白酶溶液中胰蛋白酶的濃度為1mg/mL，所加入的APTES@MSN的用量與胰蛋白酶的用量關系為：每1g胰蛋白酶加入0.5~2g APTES@MSN。

4.根據權利要求1所述的一種單寧酸為模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制備方法，其特征在于，步驟2中，所述的磷酸鹽緩沖液濃度為20mmol/L，pH為7.0~8.0。