[發明專利]一種制備卡貝縮宮素的方法

有效

• 申請號: 201610189424.6
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105622725B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 馮慶賀;徐紅巖
• 申請（專利權）人: 吉爾生化（上海）有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司 31113
• 代理人: 張勁風

1.一種制備卡貝縮宮素的方法，其特征是：包括以下步驟：1）由氨基樹脂通過偶聯劑依次與Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Alloc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH偶聯得到樹脂多肽；2）脫半胱氨酸保護；3）堿性條件下與4-鹵基丁酸反應，與H-Tyr(OMe)-OtBu偶聯；4）切割多肽，液相關環；具體為：先由哌啶溶液脫Fmoc保護基，再用TFA溶液將多肽切割保護基脫除，離心，傾出溶液，粗肽溶于DCM，冰浴加HOSu，與DCC環合，濾出固體，低溫旋干DCM，正丁醇溶解多肽，稀碳酸氫鈉溶液洗滌得，卡貝縮宮素粗肽正丁醇溶液；5）粗肽經高效逆流色譜純化，凍干得到卡貝縮宮素。

2.根據權利要求1所述的卡貝縮宮素的制備方法，其特征是：其所述的所用氨基樹脂為Rink amide樹脂，替代度為0.4mmol/g~1.2mmol/g。

3.根據權利要求1所述的一種制備卡貝縮宮素的方法，其特征是：所用偶聯試劑為DIC/HOBt、DIC/HOAt、PyBOP/HOBt、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt或HATU/HOAt中的一種。

4.根據權利要求1所述的一種制備卡貝縮宮素的方法，其特征是：脫除半胱氨酸保護基團的試劑，為四三苯基膦鈀，苯硅烷和二氯甲烷混合溶劑。

5.根據權利要求1所述的一種制備卡貝縮宮素的方法，其特征是：所述的4-鹵代丁酸為4-溴丁酸或4-氯丁酸。

6.根據權利要求1所述的一種制備卡貝縮宮素的方法，其特征是：步驟3）具體為，將脫巰基保護劑的樹脂多肽轉移至三口燒瓶中，氮氣保護，加入DMF溶劑，加入1.5~5倍量有機堿N-甲基嗎啉，開啟攪拌，冰浴，滴加1.1~4倍量4-鹵代丁酸DMF溶液，反應0.1~2小時，過濾，DMF和甲醇輪換洗滌；與H-Tyr(OMe)-OtBu偶聯，偶聯試劑為DIC/HOBt、DIC/HOAt、PyBOP/HOBt、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt或HATU/HOAt中的一種。

7.根據權利要求1所述的一種制備卡貝縮宮素的方法，其特征是：所述的純化方法采用高效逆流色譜，萃取劑為甲醇:正丁醇:水:醋酸體積比=（1~4）:(1~6):(1~5):(0.01~1)，根據高效色譜液相質譜確定出峰時間，收集卡貝縮宮素醋酸鹽純肽混合溶液，乙醚萃取洗掉正丁醇，卡貝縮宮素醋酸鹽純肽水溶液凍干，得卡貝縮宮素產品。